[发明专利]玉米C型细胞质雄性不育育性恢复基因Rf4位点紧密连锁分子标记及其应用在审
| 申请号： | 201810182440.1 | 申请日： | 2018-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN108531635A | 公开（公告）日： | 2018-09-14 |
| 发明（设计）人： | 薛亚东;汤继华;付志远;丁冬;李卫华 | 申请（专利权）人： | 河南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 郑州龙宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 41146 | 代理人： | 陈亚秋 |
| 地址： | 450000 河*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分子标记 位点 细胞质雄性不育 育性恢复基因 辅助选择 紧密连锁 核苷酸序列 扩增引物 玉米 恢复系 引物 制种 转育 基因 应用 | ||
1.玉米C型细胞质雄性不育育性恢复基因Rf4位点紧密连锁的分子标记 X-21-1和X33，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示。
2.玉米C型细胞质雄性不育育性恢复基因Rf4位点紧密连锁的分子标记的扩增引物，包括以下引物对：
X-21-1扩增引物对：
X-21-1F：5’-TTTCTTCTCAGGGTGGTCTTGC-3’，
X-21-1R：5’-CACCTTTCCACCTCGCCTATT-3’；
X33扩增引物对：
X33F：5’-CACACACGAGGGGAGGAGGT-3’，
X33R：5’-AAGGTCTTTGTTGTCGGGCA-3’。
3.玉米C型细胞质雄性不育育性恢复基因Rf4位点紧密连锁的分子标记 X-21-1和X33的扩增反应体系，每15µL含有：10×PCR Buffer 2.0µL，2.5mmol/L的 dNTPs 0.3µL，5U/µL的Taq酶0.2µL，10ng/µL的引物 2.0µL，DNA 5.0µL，ddH2O 5.5µL；所述DNA用碱裂解法提取自玉米种子，所述引物由等物质的量的X-21-1F、X-21-1R、X33F和X33R组成。
4.玉米C型细胞质雄性不育育性恢复基因Rf4位点紧密连锁的分子标记 X-21-1和X33的扩增反应体系，每15µL含有：10×PCR Buffer 1.5µL，25mmol/L的Mg2+ 1.0µL，25mmol/L的dNTPs 0.3µL，5U/µL的Taq酶 0.1µL，50ng/µL的引物 1.5µL，20ng/µL的DNA 3.0µL，ddH2O7.6µL；所述DNA用CTAB法提取自玉米种子，所述引物由等物质的量的X-21-1F、X-21-1R、X33F和X33R组成。
5.利用权利要求2所述引物扩增权利要求1所述分子标记的反应程序，依次包括：95℃2min；8个循环的95℃ 1min、65~58℃ 1min和72℃ 1min，65~58℃为从65℃开始每循环降低1℃至58℃；29个循环的95℃ 1min、58℃ 1min和72℃ 1min；72℃ 5min。
6.权利要求1所述分子标记或权利要求2所述扩增引物在不育化制种中的应用。
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