[发明专利]接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜及细菌检测的方法

说明书

本发明公开了一种接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜及细菌检测的方法，属于生物检测技术领域。该制备方法为以纳米纤维膜为基材层在其表面通过原子转移自由基聚合接枝引入葡萄糖聚合物，然后再与功能化异硫氰酸荧光素复合反应，制备得到金黄色葡萄球菌检测膜，其中，功能化异硫氰酸荧光素为异硫氰酸荧光素与牛血清蛋白的反应物。本发明制备的检测膜对金黄色葡萄球菌具备特异性设别能力，能专一的检测金黄色葡萄球菌的浓度。

技术领域

本发明涉及细菌检测，属于生物检测技术领域，具体地涉及一种接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜及细菌检测的方法。

背景技术

感染性疾病是全球第二大引起人类死亡的主要原因，而金黄色葡萄球菌(SAU)是引起人类感染的主要病原体，可引起多中国类型的感染：如皮肤软组织感染、眼眶蜂窝组织炎、坏死性筋膜炎、坏死性肺炎、心内膜炎、骨髓炎和败血症等，自1961年耐甲氧西林金黄色葡萄球菌出现以来，目前，在全球范围内已成为医院和社区获得性感染的重要起因。

由于金黄色葡萄球菌对营养要求不高，且具备高度的耐盐性，容易污染肉类、水产品、乳品等食品，包括中国在内的多个国家均将金黄色葡萄球菌作为食品卫生标准的常规检查项目之一。目前为止尚未有研究能明确的表明金黄色葡萄球菌产毒与其菌数的定量联系，故无法得知金黄色葡萄球菌菌数水平与产毒之间的关系。国外通常采用食物中菌数含量达到103CFU/g

作为金黄色葡萄球菌定量风险评估标准，我国食品中金黄色葡萄球菌检验按照GBT4789.10-20010执行，其中定量检验是第二法金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数和第三法金黄色葡萄球菌MPN计数，试验研究表明，单纯的采用上述两种方法，会由于人员差异引起测量结果的准确度。

菌落总数测试片(Petrifilm^TM)是在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数，该测试片能应用于所有的食品，但主要用于评估大多数食品的总的细菌含量水平。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明公开了一种方便快速准确检测金黄色葡萄球菌的检测膜及细菌检测的方法。

为实现上述目的，本发明公开了一种接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜的方法，它包括如下步骤：

a)制备表面活化的纳米纤维膜层：取纳米纤维膜浸渍于氢氧化钠溶液中活化处理得到表面活化的纳米纤维膜；

b)制备表面具有引发原子转移自由基的纳米纤维膜：取步骤a)得到的所述表面活化的纳米纤维膜与溴异丁酰溴反应得到表面具有引发原子转移自由基的纳米纤维膜；

c)制备表面接枝葡萄糖聚合物的纳米纤维膜：取步骤b)得到的所述表面具有引发原子转移自由基的纳米纤维膜与葡萄糖单体发生接枝共聚反应，制备得到表面接枝葡萄糖聚合物的纳米纤维膜；

d)制备异硫氰酸荧光素的牛血清蛋白溶液；

e)制备大肠杆菌检测膜：取步骤c)得到的所述表面接枝葡萄糖聚合物的纳米纤维膜浸渍于步骤d)的所述异硫氰酸荧光素的牛血清蛋白溶液中，制备得到大肠杆菌检测膜。

进一步优选的，所述步骤c)的具体反应过程如下：

所述表面具有引发原子转移自由基的纳米纤维膜与溴化亚铜混合后，在惰性气体环境中，与葡萄糖单体、二联吡啶的甲醇混合液，在80℃的恒温水浴下振荡反应10～20h，制备得到表面接枝葡萄糖聚合物的纳米纤维膜。

再进一步优选的，所述步骤c)中，所述溴化亚铜与葡萄糖单体、二联吡啶之间的物质的量之比为0.5～2:50～200:0.5～2。

更进一步优选的，所述步骤d)的异硫氰酸荧光素的牛血清蛋白溶液的制备过程如下：