[发明专利]接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜及细菌检测的方法

权利要求书

1.一种接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

a)制备表面活化的纳米纤维膜：取纳米纤维膜浸渍于氢氧化钠溶液中活化处理得到表面活化的纳米纤维膜；

b)制备表面具有引发原子转移自由基的纳米纤维膜：取步骤a)得到的所述表面活化的纳米纤维膜与溴异丁酰溴反应得到表面具有引发原子转移自由基的纳米纤维膜；

c)制备表面接枝葡萄糖聚合物的纳米纤维膜：取步骤b)得到的所述表面具有引发原子转移自由基的纳米纤维膜与葡萄糖单体发生接枝共聚反应，制备得到表面接枝葡萄糖聚合物的纳米纤维膜；

d)制备异硫氰酸荧光素的牛血清蛋白溶液；

e)制备金黄色葡萄球菌检测膜：取步骤c)得到的所述表面接枝葡萄糖聚合物的纳米纤维膜浸渍于步骤d)的所述异硫氰酸荧光素的牛血清蛋白溶液中，制备得到金黄色葡萄球菌检测膜。

2.根据权利要求1所述接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜的方法，其特征在于：所述步骤c)的具体反应过程如下：

所述表面具有引发原子转移自由基的纳米纤维膜与溴化亚铜混合后，在惰性气体环境中，与葡萄糖单体、二联吡啶的甲醇混合液，在80℃的恒温水浴下振荡反应10～20h，制备得到表面接枝葡萄糖聚合物的纳米纤维膜。

3.根据权利要求2所述接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜的方法，其特征在于：所述步骤c)中，所述溴化亚铜与葡萄糖单体、二联吡啶之间的物质的量之比为0.5～2:50～200:0.5～2。

4.根据权利要求1所述接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜的方法，其特征在于：所述步骤d)的异硫氰酸荧光素的牛血清蛋白溶液的制备过程如下：

取异硫氰酸荧光素和牛血清蛋白混合后置于水中，所述异硫氰酸荧光素与牛血清蛋白的质量比为4～8:100，控制温度为4℃，搅拌反应4～6h，去除未反应完全的异硫氰酸荧光素后调节溶液的pH为7～9，得到被异硫氰酸荧光素标记的牛血清蛋白水溶液。

5.根据权利要求1所述接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜的方法，其特征在于：所述步骤e)的具体反应过程如下：

取步骤c)得到的所述表面接枝葡萄糖聚合物的纳米纤维膜浸渍于步骤d)的所述异硫氰酸荧光素的牛血清蛋白溶液中，控制温度为4℃，反应10～20min，取出，采用清水洗涤至少2次，干燥后制备得到金黄色葡萄球菌检测膜。

6.根据权利要求1所述接枝共聚制备金黄色葡萄球菌检测膜的方法，其特征在于：所述步骤a)中，所述纳米纤维膜的厚度为100～300μm，克重为12～40gsm，所述纳米纤维膜的材质为聚乙烯-聚乙烯醇。

7.一种接枝共聚制备的金黄色葡萄球菌检测膜，其特征在于：它为权利要求1～6中任意一项所述的制备方法制备得到。

8.一种检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：它包括如下步骤：

1)选用所述权利要求7的金黄色葡萄球菌检测膜；

2)将所述步骤1)的检测膜浸入待测溶液中；

3)待5分钟后观察膜的颜色，通过肉眼观察膜颜色的变化来定性判断细菌的浓度：若膜颜色为无色，细菌的总数大于10⁵CFU/mL；若膜颜色为浅黄绿色，细菌的总数为10³～10⁴CFU/mL；若膜颜色为深黄绿色，细菌的总数为10～10³CFU/mL；若膜颜色在黄绿色基础上显橙色，细菌的总数为小于10CFU/mL。

9.根据权利要求8所述检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：定量检测的方法包括如下步骤：

4)选用权利要求7制备的检测膜；

5)取待测溶液，测定其荧光强度值，然后将所述步骤4)的检测膜浸渍于待测溶液中，在5分钟以内的每相等的时间间隔之间测定待测溶液的荧光强度值，由前后变化的数值计算荧光强度变化速率；

6)将所述步骤5)的荧光强度变化速率的数值代入标准曲线中，得到待测样品的细菌浓度值。

10.根据权利要求9所述检测金黄色葡萄球菌的方法，其特征在于：所述步骤6)中的标准曲线为金黄色葡萄球菌标准液的荧光强度变化速率与细菌浓度对数值之间的线性关系图。