[发明专利]一种烟草基因编辑素材中生物碱的测定方法

说明书

本发明公开了一种烟草基因编辑素材中生物碱的测定方法，使用以下装置：样品萃取瓶，包括：外套管(1)、内套管(2)、导液管(4)、筛板；样品萃取架(5)；样品收集架(6)；转抽(7)和下压板(8)。步骤为：①萃取；②过滤；③收集样品滤液；④使用高效液相色谱法进行测定。本发明的测定方法可用于检测烟草基因编辑素材中生物碱的含量，具有前处理简单方便、定量准确、重复性好的优点，适用于大批量样品的分析。

技术领域

本发明属于烟草化学研究领域，具体涉及一种适合烟草基因编辑素材中生物碱含量检测的高通量分析方法。

背景技术

随着烟草行业“烟草基因组计划重大专项基于基因组编辑技术的工厂化育种方案”的推进，以所有基因编辑素材为对象，通过化学成分分析对素材进行筛选，并通过烟叶的配伍性测试和卷烟配方验证，确定工业可用性强的品种，成为了烟草行业迫切需求的关键技术内容。

烟草生物碱是烟属含量很高的一类植物碱，包括近50种物质，存在于约60多个不同种的烟草中，烟草中的生物碱主要有烟碱、降烟碱、新烟碱和新烟草碱，其中烟碱是烟草中含量最高的生物碱，一般占生物碱的95％以上。烟草生物碱是一种生理兴奋剂，具有收缩血管、促进血液循环、调节中枢神经的作用；同时烟草生物碱又是影响烟草品质的关键成分，适量吸入烟草生物碱给吸烟者适当的生理刺激、愉快的香气和醇和的吃味，可以提神兴奋、振作精神、消除疲劳等，但烟草中生物碱的含量增高，极大影响烟叶的香味品质、可用性和卷烟制品的生理强度、烟气特征和吸食安全性。因此烟草生物碱含量的准确测定对烟草质量评价具有重要意义。

目前，测定烟草生物碱的方法主要光度法、气相色谱法(如毛细管GC法、GC/MS法、GC-MS/MS法)和高效液相色谱法(HPLC法)。常用的几种光度法无法同时满足灵敏度和选择性方面的要求，目前使用最多的是色谱法，且与GC法相比，HPLC法具有简单、快速、灵敏度高、重现性好等特点。超高效液相色谱(UPLC)是2004年waters公司推出了的新技术，其原理与HPLC相同，但这项技术突破了传统色谱分析的局限性，极大的提升了高效液相色谱的分析速度，进几年来在国内得到了广泛应用。

随着烟草行业烟草基因编辑工厂化育种工作的启动，通过基因编辑将产生数万个素材。要对这些海量的素材进行快速化学分析评价，常规液相色谱法周期长，很难满足海量素材快速筛选化学分析的需求。

发明内容

为了寻找更简便、快速的分析方法，我们使用超高效液相色谱法测定烟草中的生物碱，样品分析时间和常规液相色谱相比大缩短。为了简化样品前处理，我们还通过自主设计的样品前处理装置，使样品前处理周期也大大缩短。改进方法和目前常规液相色谱分析方法相比，日样品分析量大大提高。该方法的建立为基因编辑素材化学筛选提供了快速、准确、可靠的高通量分析方法。

本发明的目的在于提供一种适合烟草基因编辑素材中生物碱含量检测的高通量分析方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种烟草基因编辑素材中生物碱的测定方法，使用以下装置：

样品萃取瓶，包括：外套管1，其底部密封且为平底，其口部有一密封圈11；内套管2，其外径与所述外套管1的内径相适配，其的长度大于所述外套管1的长度；导液管4，位于所述内套管2内，其下端有一扩张口与所述内套管2的下端内壁密封固定连接，其与所述内套管2上端口固定连接形成受压面21，其上部伸出所述内套管2外部，并回弯向下；筛板3，位于所述内套管2的下端开口内，为一个或多个；样品萃取架5，其内有若干样品萃取瓶放置孔51，用于放置所述样品萃取瓶；样品收集架6，其内有若干样品瓶放置孔61和若干废液收集瓶放置孔62，用于放置样品瓶610和废液收集瓶620；转抽7，位于所述样品收集架6中心部；所述样品收集架6和所述样品萃取架5可分别围绕所述转抽7旋转；下压板8，其表面伸出有若干下压头81；

该方法包括以下步骤：