[发明专利]双链DNA抗原、其制备方法、包含其的试剂、试剂盒及应用

说明书

本发明提供了一种双链DNA抗原、其制备方法、包含其的试剂、试剂盒及应用。该制备方法包括提取双链DNA；采用蛋白酶及RNA酶去除双链DNA中的组蛋白和RNA成分得到第一纯化DNA；将第一纯化DNA剪切成500～2000bp的片段得到剪切DNA；采用核酸酶S1、外切核酸酶I和去甲基化酶消除剪切DNA中的单链和甲基化修饰的DNA分子得到第二纯化DNA；以及对第二纯化DNA进行纯化回收得到双链DNA抗原。采用各种酶对所提取的双链DNA中可能存在的蛋白、RNA、操作过程中产生的单链DNA以及修饰过的DNA分子进行降解消化，使得所得双链DNA抗原的纯度相对更高，因而使检测结果特异性高更准确。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体而言，涉及一种双链DNA抗原、其制备方法、包含其的试剂、试剂盒及应用。

背景技术

自身免疫病是由于免疫功能紊乱，机体产生针对自身抗原的病理性免疫应答反应而引起器官或系统损伤的一类疾病。目前，对于自身免疫病的发病机制尚不完全清楚。一般认为自身免疫病是遗传易感个体在环境因素如感染、紫外线、肿瘤及药物等多种因素共同作用下发生的。高滴度的自身抗体和致敏性淋巴细胞的出现是自身免疫病的基本特征，其中抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取性核抗原(ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称，抗核抗体针对的靶抗原主要是细胞内的核酸及核蛋白成分，在细胞周期的转录和翻译过程中起重要作用，对ANA的特异性检测对疾病的明确诊断具有重要的参考价值，尤其对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)、混合性结蹄组织病(mixedconnective tissue disease,MCTD)、干燥综合征(Sjogren syndrome,SS)、系统性硬化症(systemic sclerosis,SSc)、多肌炎/皮肌炎(polymyositis/dermatomyositis)和原发性胆汁性肝硬化(Primary biliary cirrhosis,PBC)等疾病的诊断具有较高的特异性。

其中系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种慢性炎症性自身免疫性疾病，主要侵犯结缔组织并影响多个器官系统。在世界范围内，在欧洲，SLE每年的新增发病率约为25/10万，而北美地区发病率更高。SLE易发于年轻女性，病程中往往复发与缓解交替出现。患者体内可产生针对核酸、核蛋白和组蛋白的抗核抗体及其他自身抗体，这些自身抗体与相应抗原结合形成免疫复合物，可沉积在心血管结缔组织、肾小球基底膜、浆膜、关节滑膜和多种脏器小血管壁上，免疫复合物在局部激活补体，吸引中性粒细胞浸润，造成局部组织的慢性炎性损伤。故SLE患者常患有多系统、多器官的损害。根据损害的器官不同，患者可出现发热、皮疹、关节痛、肾损害，心血管病变、浆膜炎、贫血、精神症状等多种临床表现。美国风湿协会与1997年修订了关于SLE诊断的11项ARA标准(ARA，美国风湿病协会)。该11项标准分别为：1.蝶形红斑；2.身体其他部位出现红色、鳞屑状、局限的、隆起的皮肤疹；3.光敏现象；4.口腔粘膜疼痛或溃疡；5.关节疼痛或关节渗出；6.浆膜炎；7.肾脏疾病；8.神经系统疾病；9.血液系统症状如伴网状细胞增多、白细胞减少、淋巴细胞减少的出血性贫血；10.免疫学方法检出抗dsDNA抗体、Sm抗体、抗心磷脂抗体；11.间接免疫荧光法检出ANA。若11项标准中出现4项，诊断SLE的可能性超过80％。

抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体，该抗体阳性为SLE的重要诊断标准之一。1967年Arana在SLE患者血清中发现了一种能与天然DNA结合的自身抗体，称为天然DNA抗体或dsDNA抗体。随着研究的深入，人们发现抗dsDNA抗体几乎仅存在于SLE患者血清中，是SLE的特异性抗体，且抗体的滴度与SLE的活动性存在相关性。