[发明专利]双链DNA抗原、其制备方法、包含其的试剂、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种双链DNA抗原的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

提取双链DNA；

采用蛋白酶及RNA酶去除所述双链DNA中的组蛋白和RNA成分，得到第一纯化DNA；

将所述第一纯化DNA剪切成500～2000bp的片段，得到剪切DNA；

采用核酸酶S1、外切核酸酶I和去甲基化酶消除所述剪切DNA中的单链和甲基化修饰的DNA分子，得到第二纯化DNA；

对所述第二纯化DNA进行纯化回收，得到所述双链DNA抗原。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，从小牛胸腺组织、鲑鱼精、Hela细胞、人血液或唾液中提取所述双链DNA。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用4.5号皮下注射器针头对所述第一纯化DNA进行吹吸的方式将所述第一纯化DNA剪切成500～2000bp的片段，得到所述剪切DNA。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述吹吸的频率为10～30次/min，所述吹吸的次数为90～120次。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在对所述第一纯化DNA剪切之前，还包括对所述第一纯化DNA进行浓缩的步骤。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述第一纯化DNA浓缩至浓度为1.8～3mg/mL。

7.一种双链DNA抗原，其特征在于，所述双链DNA抗原采用权利要求1至6中任一项所述的制备方法制备而成。

8.一种检测抗双链DNA抗体的试剂，所述试剂包括双链DNA抗原，其特征在于，所述双链DNA抗原采用权利要求1至6中任一项所述的制备方法制备而成。

9.根据权利要求8所述的试剂，其特征在于，所述试剂还包括用于负载所述双链DNA抗原的固相载体。

10.根据权利要求9所述的试剂，其特征在于，所述固相载体为磁性微球或微孔板。

11.根据权利要求9所述的试剂，其特征在于，所述固相载体为磁性微球，所述试剂还包括用于将所述双链DNA抗原包被至所述磁性微球的包被缓冲液。

12.根据权利要求11所述的试剂，其特征在于，所述包被缓冲液包括：Tris-HCl缓冲液、阳离子金属盐以及酶抑制剂，所述包被缓冲液的pH为7.5～8.5。

13.根据权利要求11所述的试剂，其特征在于，所述包被缓冲液包括：10～50mM的Tris-HCl缓冲液，0.1～0.3M的NaCl和/或KCl以及0.5～2mM的EDTA。

14.根据权利要求8至13中任一项所述的试剂，其特征在于，所述试剂还包括pH为7.5～8.5的存储缓冲液，所述存储缓冲液包括：

基础缓冲液，所述基础缓冲液包括Tris-HCl缓冲液、阳离子金属盐及防腐剂；

存储稳定液，所述存储稳定液包括DNA分子保护剂、酶抑制剂、表面活性剂、DNA双链结构稳定剂及封闭剂中的任意一种或多种。

15.根据权利要求14所述的试剂，其特征在于，所述基础缓冲液包括：10～50mM的Tris-HCl缓冲液，0.1～0.5M的NaCl和/或KCl，以及0.05～0.2wt％的防腐剂。

16.根据权利要求15所述的试剂，其特征在于，所述防腐剂为Proclin300或硫柳汞。

17.根据权利要求14所述的试剂，其特征在于，所述DNA分子保护剂为β-环状糊精、α-环状糊精或γ-环状糊精。