[发明专利]一种兽用腐败梭菌毒素及其制备方法与专用培养基

权利要求书

1.一种腐败梭菌产毒培养基，包括溶质；

所述溶质由如下质量分数的物质组成：1.5-2.0示蛋白胨、1.5-2.0酪蛋白胨、0.5-0.75酵母浸粉、0.00014-0.00028 ZnSO₄·7H₂O、0.5-0.75 Na₂HPO₄·12H₂O、0.03-0.045 KH₂PO₄和1葡萄糖。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于：所述溶质由如下质量分数的物质组成：1.5示蛋白胨、1.5酪蛋白胨、0.5酵母浸粉、0.00014 ZnSO₄·7H₂O、0.5 Na₂HPO₄·12H₂O、0.03KH₂PO₄和1葡萄糖。

3.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于：所述培养基还包括溶剂。

4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于：所述溶剂为水；

所述培养基由示蛋白胨、酪蛋白胨、酵母浸粉、ZnSO₄·7H₂O、Na₂HPO₄·12H₂O、KH₂PO₄、葡萄糖和水组成；

所述示蛋白胨在所述培养基中的浓度为15-20g/l；

所述酪蛋白胨在所述培养基中的浓度为15-20g/l；

所述酵母浸粉在所述培养基中的浓度为5-7.5 g/l；

所述ZnSO₄·7H₂O在所述培养基中的浓度为0.0014-0.0028 g/l；

所述Na₂HPO₄·12H₂O在所述培养基中的浓度为5-7.5 g/l；

所述KH₂PO₄在所述培养基中的浓度为0.3-0.45 g/l；

所述葡萄糖在所述培养基中的浓度为10-15 g/l。

5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于：所述示蛋白胨在所述培养基中的浓度为15g/l；

所述酪蛋白胨在所述培养基中的浓度为15g/l；

所述酵母浸粉在所述培养基中的浓度为5 g/l；

所述ZnSO₄·7H₂O在所述培养基中的浓度为0.0014g/l；

所述Na₂HPO₄·12H₂O在所述培养基中的浓度为5 g/l；

所述KH₂PO₄在所述培养基中的浓度为0.3 g/l；

所述葡萄糖在所述培养基中的浓度为10g/l。

6.根据权利要求1或2所述的培养基，其特征在于：所述培养基的pH值为7.5-8.0。

7.一种制备权利要求1-6中任一所述的培养基的方法，包括如下步骤：

将权利要求1-6中任一所述的培养基中除葡萄糖外其余各组分按照质量分数与水混匀，并调节pH值至7.5-8.0，灭菌后，再将葡萄糖单独配制成50%水溶液灭菌，使用前加入至所需浓度，得到培养基。

8.权利要求1-6中任一所述的培养基在制备腐败梭菌毒素中的应用。

9.一种制备腐败梭菌毒素的方法，其特征在于：

将腐败梭菌生产菌株在权利要求1-6中任一所述的培养基中发酵培养，得到发酵产物；收集发酵产物的上清液，得到腐败梭菌毒素。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：

所述发酵培养的条件为如下：

1）若所述发酵培养为烧瓶发酵，则所述发酵培养的条件为：35-37℃发酵培养23-25h；

2）若所述发酵培养为发酵罐发酵，则所述发酵培养的条件为： 35-37℃发酵培养23-25h，且发酵过程维持pH值为7.0±0.05，且发酵培养至16h时按培养基总体积的1%加入50%葡萄糖水溶液，发酵全程控制转速为25-30rpm。