[发明专利]一种心脏肌球衍生细胞在生物材料中的应用

权利要求书

1.一种心脏肌球衍生细胞在生物材料中的应用，其特征在于，所述生物材料为一种心脏移植模型。

2.根据权利要求1所述的心脏肌球衍生细胞在心脏移植模型中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

S1.心脏肌球衍生细胞(CDCs)的培养；

S2.血小板纤维蛋白支架的制备；

S3.血小板纤维蛋白支架的观察；

S4.心脏肌球衍生细胞-血小板纤维蛋白支架联合移植。

3.根据权利要求2所述的心脏肌球衍生细胞在心脏移植模型中的应用，其特征在于，所述步骤S1中的心脏肌球衍生细胞(CDCs)的培养包括以下步骤：取健康的清洁级雌性8周龄WKY大鼠心肌组织，利用组织块培养法收获细胞，再通过悬浮培养和(或)贴壁培养方式获得大鼠心脏肌球衍生细胞，在体外观察细胞形态，持续传代观察细胞活性，绘制细胞生长曲线；利用流式细胞术检测不同来源和不同培养代数的的表面标志物VEGF、IGF-1、SDF-1以及细胞的表达。

4.根据权利要求2所述的心脏肌球衍生细胞在心脏移植模型中的应用，其特征在于，所述步骤S2的血小板纤维蛋白支架的制备，还包括以下步骤：

S1.使用异氟醚深度麻醉大鼠；

S2.切开腹部皮肤，找出腹主静脉，采静脉血；

S3.将收集到的静脉血立即与8％(v/v)枸橼酸钠混匀；

S4.放入离心机中给予8000rpm离心5min，取上清液，按下述方法混合成胶成功，放入2ml离心管-20°保存待用；

S5.DMEM放入37°水浴中预热；

S6.DMEM和小板血浆上清液按照1-3：2-6比例混合，计时，观察成胶时间，以备体内试验用。

5.根据权利要求2所述的心脏肌球衍生细胞在心脏移植模型中的应用，其特征在于，所述步骤S3中的血小板纤维蛋白支架的观察，还包括以下步骤：

S1.成型的血小板纤维蛋白支架立即用PBS清洗；

S2.用5％戊二醛在0.2M二甲胂酸钠缓冲液(PH7.5)中固定30-60min；

S3.用二甲胂酸钠缓冲液清洗3次，每次5-15min；

S4.用30％、40％、60％、80％、100％乙醇脱水，每一浓度脱水5-10min，再用六甲基二硅氮烷吸干；

S5.用采用离子溅射镀膜机喷镀金属，用扫描电镜拍照。

6.根据权利要求2所述的心脏肌球衍生细胞在心脏移植模型中的应用，其特征在于，所述步骤S4中的心脏肌球衍生细胞-血小板纤维蛋白支架联合移植，还包括以下步骤：

S1.取1×106CDCs与50-100ulDMEM充分混匀，再与50-100ul富含血小板血浆混；

S2.在24孔板中加入100ul成胶前含有CDCs血小板纤维蛋白支架，每个孔中加入1ml不含FBS的IMDM；同时在另一个24孔板中加入不含CDCs的血小板纤维蛋白支架，每个孔中加入1ml不含FBS的IMDM；

S3.分别收集第1、5、9、13、17天中各孔中的培养基，同时加入等量的新鲜培养基IMDM；

S4.按照大鼠特异性的ELISA试剂盒要求，检测培养基中VEGF、IGF-1、SDF-1。