[发明专利]一种地贫点突变的膜条制备方法

说明书

本发明属于膜条杂交显示技术领域，公开了一种地贫点突变的膜条制备方法，将PCR产物置于PCR扩增仪98℃变性10分钟；变性后的扩增管取出后立即插入冰浴盒放置；同时，将装有A液的离心管置于沸水浴加热；取出离心管，将PCR产物加入所述离心管；将所述离心管置于恒温杂交仪杂交。本发明膜条杂交点显色清晰，结果易于判读；本发明没有增加科室成本，对结果判读提高了效率并且准确度高。

技术领域

本发明属于膜条杂交显示技术领域，尤其涉及一种地贫点突变的膜条制备方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：

自从昆明开展地贫基因分型以来，α地贫点突变的膜条结果显示不清晰，膜条的杂交点颜色浅淡，严重影响判读结果。造成颜色浅淡的原因，考虑为可能是因为云南海拔较高，实验过程中沸水浴加热变性达不到所要求的温度(98℃)，导致DNA变性不充分。

现有技术中，将PCR产物直接加入装有A液的15ml离心管；

将此离心管置于沸水浴中加热10分钟；

取出离心管，将此离心管置于恒温杂交仪杂交。

现有技术中，非缺失型α-地中海贫血基因通常采用PCR-DNA反向点杂交方法进行检测。

PCR聚合酶链式扩增：设计特异的PCR引物且5’端用生物素进行标记，扩增获得非缺失型α-地中海贫血目的基因片段，该片段包含了所要检测的基因型突变位点。

DNA反向点杂交(reverrsedotblot，RDB)：根据检测位点碱基差异，按照碱基互补配对原则，设计特异性寡核苷酸探针，将待用探针分别点到尼龙膜的特定位置上，再将待测的DNA样本与之杂交，经过相应的显色反应就能显出杂交信号。因此判断某一基因座位的大部分或全部等位基因，用于非缺失型α-地中海贫血基因分型。

综上所述，现有技术存在的问题是：

(1)现有的地贫点突变的膜条DNA变性不充分；膜条杂交点显色不清晰，结果不易于判读；准确度低；对于海拔高，沸点低的地区，常规的实验操作满足不了实验要求。

(2)采用亚能生物的非缺失型α-地中海贫血基因检测试剂盒、按现有技术规定步骤进行，多批次实验的最终实验结果都表现显色不足，难以判断结果。

解决上述技术问题的难度和意义：本发明为了膜条杂交点显示清晰，不影响结果判读，将原实验操作进行了改良。得到了良好积极效果。

在查找实验结果不理想的过程中，本发明考虑到在DNA反向点杂交的过程中，在进行DNA分子杂交前，要将杂交反应管置入沸水浴中10分钟，通过加热的方法，将双链DNA分子分离成为单链，这个过程称为变性。昆明地处高原，沸水的沸点较低，是否造成双链DNA分子解链不充分，商品化的试剂盒面对不同环境的地区发行，不同环境地区的差异是否对试验有不同影响。为此，本发明做了改进。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种地贫点突变的膜条制备方法。

本发明是这样实现的，一种地贫点突变的膜条制备方法，所述地贫点突变的膜条制备方法包括：

将PCR产物置于PCR扩增仪98℃变性10分钟；

变性后的扩增管取出后立即插入冰浴盒放置；

同时，将装有PCR产物的离心管置于沸水浴加热；

取出离心管，将PCR产物加入所述离心管；

将所述离心管置于恒温杂交仪杂交。