[发明专利]用于区分牦牛与非牦牛牛族的引物对组合产品、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及分子鉴定技术领域，具体而言，涉及一种用于区分牦牛与非牦牛牛族的引物对组合产品、试剂盒。本发明还涉及使用如上所述的引物对组合产品、试剂盒的区分牦牛与非牦牛牛族的方法，该方法基于等位基因特异性PCR及毛细管电泳技术进行SNP分型，根据出峰数量可快速、高效、准确的判断待检样品为牦牛制品还是普通牛制品。

技术领域

本发明涉及分子鉴定技术领域，具体而言，涉及一种用于区分牦牛与非牦牛牛族的引物对组合产品、试剂盒及方法。

背景技术

牦牛生活于高寒、高海拔以及缺氧的恶劣环境中，极端的自然环境造就了卓越的肌肉品质。近年牦牛肉以高蛋白、低脂肪、无污染等特点日益受到广大消费者的青睐。但是由于其价格与其他普通牛肉相比存在较大差异，一些不法商贩为谋取不正当利益，往往以普通牛肉及制品来冒充牦牛肉及牦牛肉制品销售给广大消费者。不仅扰乱了正常的市场秩序，侵犯了消费者权益，而且还会对牦牛产业的健康发展造成影响。因此急需开发一种行之有效的方法对市场上的牛肉来源进行鉴别。

随着分子标记技术的不断发展，DNA标记技术广泛应用于物种的区分、动植物品种的鉴定等方面，该方法灵敏度高、抗逆性好。单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphism，SNP)主要是指在基因组中由于单个碱基变异所引起的DNA序列多态性。与传统的分子标记相比，SNP标记具有密度高、分布范围广、分型简单、易于实现高通量自动化等优点。在众多的SNP分型方法中，等位基因特异性PCR(AS-PCR)具有操作简单、成本低廉和结果准确的优势，再结合具有高灵敏度、进样微量、通量大以及自动化程度极高的毛细管电泳技术(CE)，对于各种规模的实验室的方法开发应用均具有重要的应用价值。因此，本发明筛选了一组SNP标记，并采用AS-PCR结合毛细管电泳技术开展牦牛肉与普通牛肉鉴定研究。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速、简单、经济、准确的鉴别牦牛与非牦牛牛族的方法，该方法可用于区分牦牛与非牦牛牛族肉制品及骨制品等，以防止商业欺诈。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及一种用于区分牦牛与非牦牛牛族的引物对组合产品，其包括以下引物对：SEQ ID NO:1和2、SEQ ID NO:3和4、SEQ ID NO:5和6、SEQ ID NO:7和8、SEQ ID NO:9和10、SEQ ID NO:11和12、SEQ ID NO:13和14、SEQ ID NO:15和16、SEQ ID NO:17和18、SEQ IDNO:19和20。

根据本发明的一方面，本发明还涉及一种用于区分牦牛与非牦牛牛族的试剂盒，其包括如上所述的引物对组合产品以及阳性对照引物对；所述阳性对照引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:21和22所示。

根据本发明的一方面，本发明还涉及一种区分牦牛与非牦牛牛族的方法，包括：

提取检测牦牛和/或非牦牛牛族样本的基因组DNA，使用如上所述的引物对组合产品、或如上所述的试剂盒对所述基因组DNA分别进行PCR扩增并对扩增产物进行电泳检测；

除阳性对照外：若有≤3对的引物出现扩增产物，则为牦牛；若有≥5对的引物出现扩增产物，则为非牦牛牛族。

与现有技术相比，本发明所提供的方法操作简便，数据分析简单直观，利用毛细管电泳可以在短时间内实现对多个样本进行检测，操作简便，效率高，特别适合于大量样本的分析鉴定，为保护消费者的合法权益提供保障，同时为食品安全的监管提供技术支持。

附图说明