[发明专利]用于区分牦牛与非牦牛牛族的引物对组合产品、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于区分牦牛与非牦牛牛族的引物对组合产品，其包括以下引物对：SEQ IDNO: 1和2、SEQ ID NO: 3和4、SEQ ID NO: 5和6、SEQ ID NO: 7和8、SEQ ID NO: 9和10、SEQID NO: 11和12、SEQ ID NO: 13和14、SEQ ID NO: 15和16、SEQ ID NO: 17和18、SEQ IDNO: 19和20。

2.一种用于区分牦牛与非牦牛牛族的试剂盒，其包括权利要求1所述的引物对组合产品以及阳性对照引物对；所述阳性对照引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO: 21和22所示。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、水、上样缓冲液和DNA分子量内标中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶选自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu、Tth、Pwo、Kod、Klenow片段。

5.一种区分牦牛与非牦牛牛族的方法，其特征在于，包括：

提取检测牦牛和/或非牦牛牛族样本的基因组DNA，使用权利要求1所述的引物对组合产品、或权利要求2-4任一项所述的试剂盒对所述基因组DNA分别进行PCR扩增并对扩增产物进行毛细管电泳检测；

除阳性对照外：若有≤3对的引物出现扩增产物，则为牦牛；若有≥5对的引物出现扩增产物，则为非牦牛牛族。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在进行所述PCR扩增时，引物对SEQ ID NO:1和2、SEQ ID NO: 3和4、SEQ ID NO: 5和6、SEQ ID NO: 7和8、SEQ ID NO: 9和10、SEQ IDNO: 11和12、SEQ ID NO: 13和14、SEQ ID NO: 15和16、SEQ ID NO: 17和18、SEQ ID NO:19和20所对应的退火温度依次为：

58℃-62℃、53℃-57℃、58℃-62℃、53℃-57℃、53℃-57℃、53℃-57℃、58℃-62℃、53℃-57℃、58℃-62℃、58℃-62℃。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在进行所述PCR扩增时，引物对SEQ ID NO:1和2、SEQ ID NO: 3和4、SEQ ID NO: 5和6、SEQ ID NO: 7和8、SEQ ID NO: 9和10、SEQ IDNO: 11和12、SEQ ID NO: 13和14、SEQ ID NO: 15和16、SEQ ID NO: 17和18、SEQ ID NO:19和20所对应的退火温度依次为60℃、55℃、60℃、55℃、55℃、55℃、60℃、55℃、60℃、60℃。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述基因组DNA通过饱和苯酚-氯仿法、树脂提取法或磁珠提取法提取。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述牦牛和/或非牦牛牛族样本为牦牛和/或非牦牛牛族的组织、血液、唾液、精液、骨骼或毛发。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述组织为肌肉组织。

11.根据权利要求5-10任一项所述的方法，其特征在于，所述非牦牛牛族为非牦牛牛属。

12.根据权利要求5-10任一项所述的方法，其特征在于，所述非牦牛牛族包括原牛B. primigenius、尖额牛B. acutifrons、平额牛B. planifrons、爪哇野牛B. javanicus、印度野牛B. gaurus、大额牛B. frontalis、家牛B. taurus、柬埔寨野牛B. sauveli。