[发明专利]一种具有穗发芽抗性的小麦分子育种方法在审
| 申请号： | 201810068221.0 | 申请日： | 2018-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN108048482A | 公开（公告）日： | 2018-05-18 |
| 发明（设计）人： | 林曙东 | 申请（专利权）人： | 安徽天勤农业科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 230000 安徽省合肥市*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 具有 发芽 抗性 小麦 分子 育种 方法 | ||
1.一种具有穗发芽抗性的小麦分子育种方法，其特征在于：包括以下步骤，
(1)以穗发芽抗性品种万县白麦VplB基因序列为模板在GenBanK中Blast，获得含有VplB基因及VplB基因上游序列的BAC序列；
(2)以VplB基因上游序列的BAC序列为模板设计引物Bi-TF和Bi-TR，并分离小麦VplB基因上游2232bp的启动子；
(3)采用5’缺失的方法构建瞬时表达载体，将分离的缺失片段用HindIII和BamHI酶切后，与相同酶切后的pBI121载体片段连接，用于构建基因植物表达载体；
(4)采用Gateway方法构建农杆菌介导的植物表达载体；
(5)将植物表达载体分别与辅助载体PAL154均匀混合后，采用电击法转入农杆菌AGL1，并通过农杆菌介导法转化小麦；
(6)观察记录小麦收获前的穗发芽状况。
2.根据权利要求1所述的一种具有穗发芽抗性的小麦分子育种方法，其特征在于，步骤(3)中所述5’缺失的方法构建瞬时表达载体，5’的上游引物分别为Bi-1822F、Bi-1129F、Bi-852F、Bi-660F和Bi-319F，5’的下游引物Bi-TR,PCB扩增长度分别为1822、1129、852、660和319bp的启动子缺失片段。
3.根据权利要求1所述的一种具有穗发芽抗性的小麦分子育种方法，其特征在于，步骤(5)中所述植物表达载体和辅助载体PAL154的混合比例为1:1。
4.根据权利要求1所述的一种具有穗发芽抗性的小麦分子育种方法，其特征在于，步骤(6)中所述小麦在阴雨或潮湿环境下引诱小麦穗发芽，而穗未发芽的小麦，则具有穗发芽抗性。
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