[发明专利]一种草鱼IgM单克隆抗体、其制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种草鱼IgM单克隆抗体、其制备方法及其应用；草鱼IgM单克隆抗体由保藏号为C2017130的杂交瘤细胞株产生；草鱼IgM单克隆抗体的应用为将草鱼IgM单克隆抗体应用于检测鱼类Ig水平的试剂或试剂盒的制备、应用于治疗鱼类病毒感染的药物的制备、应用于评价鱼类疫苗免疫效果的试剂的制备、在鱼类免疫功能评价方面的应用；还提供了杂交瘤细胞株；草鱼IgM单克隆抗体可以提高血清抗体检测过程的灵敏度，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种草鱼IgM单克隆抗体、其制备方法及其应用，属于生物工程技术领域。

背景技术

真骨鱼血清中免疫球蛋白(Immunoglobulin，Ig)主要以四聚体IgM的形式存在。IgM分子量约100KDa,其中重链大小为75KDa,轻链大小为25KDa。在IgM抗体制备中，利用商品化Protein A/G亲和层析时，Protein A/G对IgM的结合效率较低，较难纯化出IgM，因此有必要以人工的方式获得IgM单克隆抗体。而以鱼类的IgM单克隆抗体为基础，通过分析可以评价鱼类的免疫功能、利用鱼类血液、免疫器官和组织中抗体水平变化规律来评价疫苗免疫效果的方法、对于治疗药物的效果研究等。此外，针对目前市场针对鱼类血清抗体的检测，现有的检测法是以病毒重组蛋白作为固相包被物、以HRP标记的IgM抗体作为检测抗体建立的间接ELISA检测法，应用这一方法反复测试发现，ELISA检测P/N值较小，对样品检测的分辨率较低。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种草鱼(Ctenopharyngodon idellus)IgM单克隆抗体，分类命名为杂交瘤细胞Carp IgM单抗，可以提高血清抗体检测过程的灵敏度。

本发明的第二个目的在于提供上述草鱼IgM单克隆抗体的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供一种草鱼IgM单克隆抗体的应用

本发明的第四个目的在于提供一种杂交瘤细胞株。

实现本发明的第一个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种草鱼IgM单克隆抗体，所述草鱼IgM单克隆抗体由杂交瘤细胞株产生；杂交瘤细胞株由中国典型培养物保藏中心进行保藏，地址为：中国武汉大学，保藏日期为：2017年8月18日，保藏号为CCTCC NO:C2017130。

实现本发明的第二个目的可以通过采取如下技术方案达到：一种草鱼IgM单克隆抗体的制备方法，包括：

培养步骤：培养保藏号为CCTCC NO:C2017130的杂交瘤细胞株，使之分泌单克隆抗体；

纯化步骤：将单克隆抗体纯化。

实现本发明的第三个目的可以通过采取至少一个如下技术方案的达到：

一种草鱼IgM单克隆抗体的应用，将草鱼IgM单克隆抗体应用于检测鱼类Ig水平的试剂或试剂盒的制备。

进一步地，所述试剂或试剂盒以草鱼IgM单克隆抗体作为固相包被物，以HRP标记的病毒蛋白作为检测抗原。

一种草鱼IgM单克隆抗体的应用，将草鱼IgM单克隆抗体应用于治疗鱼类病毒感染的药物的制备。

一种草鱼IgM单克隆抗体的应用，将草鱼IgM单克隆抗体应用于评价鱼类疫苗免疫效果的试剂的制备。

一种草鱼IgM单克隆抗体的应用，草鱼IgM单克隆抗体在鱼类免疫功能评价方面的应用。

进一步地，所述免疫功能评价为草鱼对草鱼呼肠孤病毒II型的免疫功能评价或大口黑鲈对大口黑鲈病毒的免疫功能评价。

进一步地，鱼类免疫功能评价包括：