[发明专利]一种细胞核的提取方法在审
| 申请号： | 201810004997.6 | 申请日： | 2018-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN109988745A | 公开（公告）日： | 2019-07-09 |
| 发明（设计）人： | 张雪梅;王文伟;祁晓燕;张静 | 申请（专利权）人： | 复旦大学 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细胞核 细胞核提取 离体 生物医学技术 心室心肌细胞 分离细胞核 生物安全性 生物学特征 研究和应用 有效地实现 方法体系 分离细胞 基础研究 临床应用 人类细胞 新型细胞 心肌细胞 心室肌 亚细胞 分馏 富集 核级 可用 溶质 筛选 细胞 参考 检测 评估 安全 | ||
1.一种细胞核提取的方法，其特征在于，该方法为，从离体的实验动物心脏心肌和心室肌细胞样本中分离和提取细胞核，其包括选择性地采用渗透质膜分离与甾醇相互作用的强心苷和洋地黄苷，透化后，使用Dounce匀浆器，然后通过差示蔗糖密度梯度离心，通过机械粉粹从剩余的细胞器体中释放细胞核，获得核富集部分。
2.按权利要求1所述的细胞核提取的方法，其特征在于，其包括步骤：
步骤一、获得离体的犬心肌细胞，步骤二、亚细胞分馏。
3.按权利要求1或2所述的细胞核提取的方法，其特征在于，所述的步骤一中包括分步骤：
1)准备含氧化合物缓冲液及有关器械和灌注装置；
2)常规处理实验动物获得离体实验动物心脏；
3)离体的实验动物心脏灌流法灌注和消化，获得心肌细胞。
4.按权利要求1或2所述的细胞核提取的方法，其特征在于，所述的步骤二中包括分步骤：
1)离体的实验动物心肌组织以及心肌细胞均匀化；
2)组织和细胞匀浆差速离心，得分离的粗核及膜和胞质；
3)不连续的蔗糖密度梯度离心，获得粗核沉淀层后再离心，得分离的核并显示细长的杏仁形或圆形，并对DNA染色阳性。
5.按权利要求1或2所述的细胞核提取的方法，其特征在于，所述步骤二中所有分步骤均在冰上或4度下进行。
6.按权利要求1或2所述的细胞核提取的方法，其特征在于，所述方法中心肌细胞分离时，所有程序使用超纯1型水。
7.按权利要求1或2所述的细胞核提取的方法，其特征在于，所述方法中分离的核通过免疫荧光或免疫印迹进行进一步表征。
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