[发明专利]重组DNA聚合酶

说明书

提供一种重组DNA聚合酶，其为如下A)‑C)中任一种：A)所示的蛋白为将野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第408、409和485位氨基酸残基进行修饰，且对所述野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第53、59、199、243、526、558、613、641、671、673、674、692和709位这13位中至少一位的氨基酸残基进行修饰，得到具有DNA聚合酶活性的蛋白；B)所示的蛋白为将A)所示蛋白的氨基酸序列C端的自末端起1‑29个氨基酸去除，保留其余氨基酸残基且具有DNA聚合酶活性的由A)衍生的蛋白质；C)所示的蛋白为将A)或B)所示蛋白的氨基酸序列末端添加标签序列且具有DNA聚合酶活性的由A)或B)衍生的蛋白质。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种重组DNA聚合酶。

背景技术

DNA聚合酶快速而准确地复制在生物染色体中的DNA，对于维持生命体中遗传物质稳定性具有重要意义。基于与大肠杆菌聚合酶I、II和III的氨基酸序列差异，DNA聚合酶分为三个家族，分别称为A、B和C族。尽管在结构上A、B族聚合酶的核苷酸结合位点相似，但不同族聚合酶序列模体(motif)则有显著不同，并相应表现在对核苷酸及其类似物的识别机理上的差异。与其在生命体中功能紧密相关，DNA聚合酶在分子生物学技术中居于核心地位，尤其表现在分子克隆及PCR、定点突变和DNA测序方面。在这些分子生物学技术中，DNA聚合酶识别不同的核苷酸或核苷酸类似物及其与模板的互补性起到关键作用。

许多实际应用技术依赖于能够准确加入核苷酸或核苷酸类似物的DNA聚合酶。例如，在边合成边测序(SBS)中，加入经过荧光标记的核苷酸能够帮助识别模板DNA碱基，从而给出DNA序列信息。近年来，与其它测序方法相比，SBS测序方法以其通量高、价格低而获得青睐。在这一测序方法中，加入和检测人工修饰的核苷酸或核苷酸类似物，如带有荧光标记的可逆终止子(reversible terminator)的DNA聚合酶起到关键性作用。在DNA聚合反应中，已有聚合酶对人工修饰的核苷酸或核苷酸类似物的聚合能力不足经常成为限制性因素，鉴于此，增进聚合酶对人工修饰的核苷酸或核苷酸类似物的聚合效能成为这类测序方法的重要一步。

发明公开

本发明的一个目的是提供一种蛋白质。

本发明提供的蛋白质，是如下A)-D)中任一种：

A)所示的蛋白为将野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第408、409和485位氨基酸残基进行修饰，得到具有DNA聚合酶活性的蛋白；

B)所示的蛋白为将野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第408、409和485位氨基酸残基进行修饰，且对所述野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第53、59、199、243、526、558、613、641、671、673、674、692和709位这13位中至少一位的氨基酸残基进行修饰，得到具有DNA聚合酶活性的蛋白；

C)所示的蛋白为将A)或B)所示蛋白的氨基酸序列C端的自末端起1-29个氨基酸去除(包括第29个氨基酸)，保留其余氨基酸残基且具有DNA聚合酶活性的由A)衍生的蛋白质；

D)所示的蛋白为将A)或B)或C)所示蛋白的氨基酸序列末端添加标签序列且具有DNA聚合酶活性的由A)或B)或C)衍生的蛋白质。

上述蛋白质中，

B)所示的蛋白为将野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第408、409和485位氨基酸残基进行修饰，且对所述野生型KOD型DNA聚合酶氨基酸序列中第53、59、199、243、526、558、613、641、671、673、674、692和709位这13位中至少2位的氨基酸残基进行修饰，得到具有DNA聚合酶活性的蛋白。

上述蛋白质中，