[发明专利]制备天然杀伤T(NKT)细胞刺激性树突细胞的方法及制备含有NKT细胞刺激性树突细胞和NKT细胞的细胞组合物的方法

说明书

本申请提供了一种制备NKT细胞刺激性树突细胞的方法，该方法包括：将单个核细胞置于培养容器内并通过保持该培养容器静置而使得所述单个核细胞中的一些沉降于所述容器的底表面上的步骤；将除已沉降于所述培养容器的底表面上的细胞以外的悬浮细胞去除的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使已沉降于所述底表面上的细胞中的单核细胞分化为未成熟树突细胞的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使所述未成熟树突细胞成熟；和通过向所述培养容器内添加α‑半乳糖神经酰胺而将成熟树突细胞诱导为NKT细胞刺激性树突细胞的步骤。

技术领域

本发明涉及制备NKT细胞刺激性树突细胞的方法，以及制备包含NKT细胞刺激性树突细胞和NKT细胞的细胞组合物的方法。

背景技术

在近来的治疗癌症的方法中，除了外科手术、化疗和放疗外，涉及从患者提取免疫细胞、使该细胞活化并随后将所述细胞返回至患者的免疫疗法正得到关注。体内免疫细胞数目的减少或者免疫细胞活性的下降可能是导致癌症发作的原因。在免疫疗法中，这通过增加免疫细胞的数目等从而攻击癌细胞来克服。

在用于癌症免疫疗法的方法的一个已知实例中，通过如下步骤来治疗癌症：用α-半乳糖神经酰胺脉冲外周单个核细胞以使包含在所述单个核细胞中的NKT细胞活化或增殖，然后将所述NKT细胞施用于患者。致力于肺癌的该疗法的临床研究已有所进展(例如，参见非专利文献1)。

NKT细胞是拥有T细胞和天然杀伤细胞(NK细胞)两者的特性的T细胞亚组。 NKT细胞构成外周血中的T细胞的仅约0.1％。NKT细胞的限定性特征在于，在活化时，其产生大量的IFN-γ、IL-4、和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。

已知当α-半乳糖神经酰胺(α-GalCer)被CD-1d分子呈递至抗原呈递细胞(树突细胞)的表面上时，NKT细胞在活化信号经T细胞受体Vα24Vβ11在NKT细胞表面上传递时活化。

引用列表

非专利文献

非专利文献1：Shinichiro Motohashi,Kaoru Nagato,Naoki Kunii,HeizaburoYamamoto,Kazuki Yamasaki,Kohsuke Okita,Hideki Hanaoka,Naomi Shimizu,MakotoSuzuki,Ichiro Yoshino,Masaru Taniguchi,Takehiko Fujisawa和Toshinori Nakayama,A Phase I-II Study ofα-Galactosylceramide-Pulsed IL-2/GM-CSF-CulturedPeripheral Blood Mononuclear Cells in Patients with Advanced and RecurrentNon-Small Cell Lung Cancer1,The Journal of Iummnolog 182:2492-2501(2009)。

发明内容

发明解决的问题

在过去还没有高效且经济地制备NKT细胞刺激性树突细胞的方法。

因此，本发明的问题在于提供经济地制备NKT细胞刺激性树突细胞的方法。

解决问题的方案

本发明的一个实施方式是制备NKT细胞刺激性树突细胞的方法。该制备方法的特征在于包括以下步骤：

将单个核细胞置于培养容器内并保持该培养容器静置，从而使得所述单个核细胞中的一些能附着于所述容器的底表面；

将除已附着于所述培养容器的底表面的细胞以外的悬浮细胞去除；

向所述培养容器内添加预定的因子，从而使已附着于所述底表面的细胞中的单核细胞分化成未成熟树突细胞；