[发明专利]核酸提取和扩增对照及其使用方法

权利要求书

1.一种在含有对照核酸分子的样品中扩增多种核酸靶序列的方法，该方法包括：

并行进行多个扩增反应，所述多个扩增反应中的每一个包括样品的一部分和一对扩增引物，所述一对扩增引物被配置为扩增对照核酸分子中的相应靶序列，其中所述对照核酸分子包含多种不同的靶序列；

在对照核酸分子中形成对应于至少两种不同靶序列的多个不同扩增产物；以及

确定扩增反应中至少存在两种不同的扩增产物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述对照核酸分子含有至少十种不同的靶序列。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述对照核酸分子含有至少20种不同的靶序列。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述对照核酸分子含有至少30种不同的靶序列。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述对照核酸分子含有约20至约50种不同的靶序列。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述多种不同的靶序列衍生自不同微生物的基因组或转录组序列。

7.根据权利要求6所述的方法，其中至少两种不同的靶序列包括选自表2中列出的序列组或其互补序列的序列。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述多种不同的靶序列是衍生自选自表3的任何数量的微生物基因。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述形成包括形成与含表2中列出的来自序列组所选序列互补或相同的核酸序列的一种或多种扩增产物。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述形成包括为表2中列出的每个序列形成单独的扩增产物。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述形成包括并行形成5至100种不同的扩增产物。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述形成包括并行形成以平行的10至50种不同的扩增产物。

13.根据权利要求1所述的方法，其中至少一对所述扩增引物配置产生扩增相应靶序列，包括含有与所述相应靶核酸序列的一部分互补或相同的核酸序列的引物。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个扩增反应中的至少两个各自包含被配置为扩增不同的相应靶序列的一对扩增引物。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个扩增反应中的每个扩增反应包含扩增引物，所述扩增引物被配置为扩增包含选自表2中列出的序列组或其互补序列的序列。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个扩增反应中的一个或多个还含有可检测标记的探针，其包括与所述相应靶序列的一部分相同或互补的序列。

17.根据权利要求16所述的方法，其中至少一种扩增反应的所述可检测标记的探针被配置为在5’核酸酶测定法中通过聚合酶进行裂解。

18.根据权利要求16所述的方法，其中至少一种扩增反应的所述可检测标记的探针在其5’末端含有荧光标记，在其3’末端含有猝灭剂。

19.根据权利要求16或17所述的方法，其中所述可检测标记的探针还含有小沟结合物(MGB)部分。

20.根据权利要求1至19权利要求的任何一项所述的方法，其中至少一个所述扩增反应在载体内或载体上存在的单独的反应位点发生，所述载体含有一个或多个单独的反应位点。