[发明专利]经修饰的链球菌溶血素O

说明书

[问题]提供具有优异特性如抗原活性和热稳定性的链球菌溶血素O；其制备方法；及其用途。[解决方案]包含以下氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列具有从SEQ ID NO：1的位置2的赖氨酸残基延伸至位置31的丙氨酸残基，位置32的谷氨酸残基，位置33的丝氨酸残基，和位置34的天冬酰胺残基中任一的多肽的缺失，并且还具有SEQ ID NO：1的位置465的异亮氨酸残基至位置472的丙氨酸残基中任一和所有随后氨基酸残基的缺失。

技术领域

本发明涉及链球菌溶血素O(以下在本说明书中也称为“SLO”)及其用途。更具体地，本发明涉及链球菌溶血素O，产生所述蛋白质的微生物，所述蛋白质的制备方法，使用所述蛋白质测量抗链球菌溶血素O(以下在本说明书中也称为“ASO”)的方法，等等。

背景技术

SLO是由酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)胞外产生的具有溶血活性的蛋白质，广泛用于ASO测量试剂的原料以用于诊断酿脓链球菌感染。

酿脓链球菌通常被培养用于产生SLO。然而，酿脓链球菌的SLO生产率非常低，并且酿脓链球菌产生的SLO纯度低；因此，存在一个问题，即SLO的质量不稳定。因此，为了提高生产率和稳定性，已经研究了使用重组大肠杆菌(Escherichia coli)的SLO(PTL 1，PTL 2，NPL 1和NPL 2)。

然而，NPL 1报道当使用重组大肠杆菌生产SLO时，不仅产生全长型SLO，而且还产生低分子量型SLO(其在距C端侧至少50个氨基酸残基的区域中被切割)(NPL 1将全长型SLO称为高分子量型SLO)。在NPL 1中，使用重组大肠杆菌提高了生产率；然而，难以通过工业规模控制全长型SLO(以下在本说明书中也称为“全长型”)和低分子量型SLO的比例。因此，尚未实现质量稳定性。

此外，因为SLO是具有溶血活性的蛋白质，所以就制造商的安全性而言需要降低溶血活性。NPL 2报道了通过删除C端的若干个氨基酸残基来降低溶血活性。

引用列表

专利文献

PTL1：JPH05-184372A

PTL2：JPH06-237775A

非专利文献

NPL 1：Michael A.Kehoe等，Infection and Immunity，Vol.63，No.7，2776-2779，1995

NPL 2：Akira Taketo等，Biosci.Biotechnol.Biochem.，65(12)，2682-2689，2001，45(14)，4455-62

发明概述

技术问题

本发明是鉴于现有技术的现状而作出的。本发明的目的是提供SLO，其确保高生产率并具有与天然SLO相当的表位，而没有全长型SLO和低分子量型SLO的共存的情况。此外，就生产而言，需要不具有溶血活性且具有高热稳定性的SLO。本发明的另一个目的是提供还具有这种特性的SLO。

问题的解决方案

为了实现上述目的，发明人对SLO的表达区域进行了广泛的研究，并因此发现了克服所有问题的SLO。具体地，为了防止全长型SLO和低分子量型SLO的共存，表达了具有C端区域缺失的经修饰的SLO(以下在本说明书中也称为“片段型”)。

经修饰的SLO引起对表位丧失问题的担心；然而，发明人出人意料地证实，即使全长型SLO的C端侧的约100个氨基酸残基的区域缺失，抗原活性也不会丧失，并且每蛋白的抗原活性比全长型SLO更大地提高。这意味着在从全长型SLO缺失的约100个氨基酸残基的区域中没有重要的表位。