[发明专利]一组鉴定僵蚕的特异性引物及其鉴定方法

权利要求书

1.一组鉴定僵蚕的特异性引物，所述引物为PBM-1或PBM-2和PBB-1或PBB-2；PBM-1上下游引物如SEQ.ID.NO.1和2所示，PBM-2上下游引物如SEQ.ID.NO.3和4所示；PBB-1上下游引物如SEQ.ID.NO.5和6所示，PBB-2上下游引物如SEQ.ID.NO.7和8所示。

2.根据权利要求1所述的鉴定僵蚕的特异性引物，所述引物还包括引物PMA-1或PMA-2；PMA-1上下游引物如SEQ.ID.NO.9和10所示；PMA-2上下游引物如SEQ.ID.NO.11和12所示。

3.权利要求2所述的引物在鉴定僵蚕真伪或掺伪中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用为首先鉴定僵蚕是否来源于家蚕和白僵菌，其次鉴定其中是否掺杂绿僵菌。

5.一种特异性鉴定僵蚕的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物对、DNA阳性对照、PCR反应体系和/或电泳鉴定体系。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括权利要求2中所述的引物PMA-1或PMA-2。

7.一种特异性鉴定僵蚕的方法，其特征在于，采用权利要求5或6中所述的试剂盒进行，按照下述步骤进行：

（1）采用CTAB法提取僵蚕样品的DNA；

（2）将僵蚕样品的DNA模板与特异性引物进行PCR扩增；

（3）将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析和凝胶成像系统检测条带。

8.根据权利要求7所述的一种特异性鉴定僵蚕的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的PCR扩增，其反应体系1×PCR缓冲液、2.0mmol/LMgCl₂、0.2mmol/LdNTPs、0.1μmol/L~0.4 μmol/L引物对、0.625UTaqDNA聚合酶、模板DNA1ng~600ng，以灭菌ddH₂O补足至25μL。

9.根据权利要求7所述的一种特异性鉴定僵蚕的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的PCR扩增程序为：95℃预变性3min；95℃变性30s，56℃~65℃退火30s，72℃延伸1min，循环数30~40；72℃延伸7min。