[发明专利]谷氨酰胺合成酶基因以及应用在审
| 申请号： | 201711481610.8 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109988777A | 公开（公告）日： | 2019-07-09 |
| 发明（设计）人： | 时红星;赵钰;陈明月;祁碧玉;贺伟伟;邹晋晋;张丽华 | 申请（专利权）人： | 南京金斯瑞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/52 | 分类号： | C12N15/52;C12N9/00;C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 北京华睿卓成知识产权代理事务所(普通合伙) 11436 | 代理人： | 程淼 |
| 地址： | 211100 江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 谷氨酰胺合成酶基因 真核表达载体 核苷酸序列 扩增系统 目的蛋白 高表达 细胞株 可用 筛选 应用 | ||
1.一种谷氨酰胺合成酶基因，其具有如SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列。
2.一种真核表达载体，其含有权利要求1所述的谷氨酰胺合成酶基因。
3.如权利要求2所述的真核表达载体，其是通过将初始载体pcDNA3.1(+)位点2136-2931bp间序列替换为所述谷氨酰胺合成酶基因而得到。
4.如权利要求2或3所述的真核表达载体，其是通过以下步骤制备：
1)将初始载体pcDNA3.1(+)位点2136-2931bp间序列替换为mGS基因以获得中间载体pcDNA3.1-mGS，其中所述mGS基因具有如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列；
2)将初始载体pcDNA3.1(+)位点232-819bp间序列克隆进所述中间载体pcDNA3.1-mGS的1252-1253bp位点之间，以获得载体pcDNA3.1-mGS-DGV；以及
3)将所述载体pcDNA3.1-mGS-DGV上mGS基因替换为所述谷氨酰胺合成酶基因。
5.一种在宿主细胞中表达目的蛋白的方法，包括将所述目的蛋白的编码基因和权利要求1所述的谷氨酰胺合成酶基因可操作地置于同一真核表达载体中并将所述真核表达载体导入所述宿主细胞。
6.如权利要求5所述的方法，其中还包括在缺乏外源谷氨酰胺并存在甲硫氨酸砜亚胺的条件下培养所述宿主细胞，以便让所述目的蛋白的编码基因在所述宿主细胞中得到扩增。
7.如权利要求5或6所述的方法，其中所述宿主细胞为CHOK1细胞。
8.如权利要求5所述的方法，其中所述目的蛋白为抗体，所述目的蛋白的编码基因包括所述抗体的重链编码基因和轻链编码基因。
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