[发明专利]一种基因编辑系统及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201711459376.9 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN108118057B | 公开（公告）日： | 2021-04-06 |
| 发明（设计）人： | 吴文书 | 申请（专利权）人： | 吴文书 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N9/22;A61K48/00;A61P7/04 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 江苏省苏州市昆山*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因 编辑 系统 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种基因供体，其特征在于，所述基因供体按照5’-3’方向顺次包括：gRNA识别序列、剪接受体序列、凝血因子VIII基因23-26号外显子序列、转录终止信号序列和gRNA识别序列；
所述gRNA识别序列与靶标DNA序列反向互补。
2.根据权利要求1所述的基因供体，其特征在于，所述gRNA识别序列如SEQ ID NO.3-4所示。
3.一种基因编辑系统，其特征在于，所述基因编辑系统包括gRNA和Cas9蛋白表达载体；
所述gRNA的核酸序列如SEQ ID NO.1-2所示；
所述基因编辑系统还包括如权利要求1或2所述的基因供体。
4.一种制备如权利要求3所述的基因编辑系统的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)设计gRNA的引物，变性后冷却至室温，得到所述gRNA；
(2)将gRNA克隆到表达载体上，得到表达gRNA的载体；
(3)将基因供体克隆到表达载体上，得到所述基因编辑系统。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述gRNA的引物如SEQ ID NO.5-8所示。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述变性的温度为95-98℃。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述表达载体为pSpCas9 BB-2A-GFP质粒。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)设计gRNA的引物，在95-98℃变性后冷却至室温，得到所述gRNA；
(2)将gRNA克隆到pSpCas9 BB-2A-GFP质粒上，得到表达gRNA的载体；
(3)将基因供体克隆到表达载体上，得到所述基因编辑系统。
9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如权利要求3所述的基因编辑系统。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或至少两种的组合。
11.一种如权利要求3所述的基因编辑系统和/或如权利要求9或10所述的药物组合物在制备修复凝血因子VIII基因22号内含子倒位和/或血友病的药物或试剂中的应用。
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