[发明专利]共表达CD40抗体与间皮素特异性嵌合抗原受体的T细胞及其用途

说明书

本发明涉及共表达CD40抗体与间皮素特异性嵌合抗原受体的T细胞及其用途。本发明的T细胞含有识别间皮素的嵌合抗原受体的编码序列和CD40激活性抗体的编码序列；和/或表达识别间皮素的嵌合抗原受体和CD40激活性抗体。本发明的T细胞中外源表达的CAR基因可以准确的靶向间皮素抗原，增强T细胞的增殖能力及细胞因子的分泌，表达的CD40抗体能够帮助CAR‑T细胞突破肿瘤微环境的抑制，提升CAR‑T细胞的存活率与效力，从而增强CAR‑T细胞对肿瘤细胞的杀伤，并通过增强免疫反应，发挥抗肿瘤作用。

技术领域

本发明属于基因工程学和免疫学，涉及共表达CD40抗体与间皮素特异性嵌合抗原受体的T细胞及其用途。

背景技术

肿瘤免疫疗法是当前肿瘤治疗领域中最具前景的研究方向之一，《science》杂志将肿瘤免疫疗法评为2013年十大科学突破第一位。肿瘤免疫疗法类目繁多，迄今为止，最热门、疗效最佳、最具潜力攻克肿瘤顽疾的免疫治疗法为嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)。诺华的Kymriah和Kite的Yescarta两款CAR-T产品已经获批上市。

嵌合型抗原受体(CAR)是一种人工合成受体，它通常包含胞外抗原结合域、跨膜铰链区和胞内信号转导区。通过将识别肿瘤相关抗原(tumor associated antigen,TAA)的抗体单链可变区(scFv)和胞内信号域“免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptortyrosine-based activation motifs，ITAM)”在体外进行基因重组，生成重组质粒。再将这种质粒通过基因转导的方法转入T细胞中，这样经过基因改造的T细胞称之为CAR-T细胞。CAR-T细胞在体外经大规模扩增后，回输到患者体内，能够以非MHC限制性的模式表现强效的抗癌作用。

2016年底，已记录了220项CAR-T细胞试验，目前的试验中，针对血液恶性肿瘤的有133项，针对实体瘤的有78项。CAR-T细胞在血液类的癌症治疗中取得了很大的成功，例如其中最常用的抗原MESO，平均客观应答率超过60％。但血液肿瘤仅仅是众多癌症中较小的一部分，实体瘤占据肿瘤的90％，而CAR-T在血液肿瘤的疗效与实体肿瘤治疗效果相差甚远。主要原因包括：1.实体瘤异质性高，缺乏适合CAR-T治疗的细胞表面靶点。2.实体瘤具有强烈抑制免疫的微环境。

间皮素是一种通过磷脂酰肌醇区(GPI)锚定在细胞质膜上的糖蛋白，高表达于多种肿瘤组织中，少量表达于正常胸膜、心包和腹膜的间皮细胞中。间皮素基因编码一种69kDa的前体蛋白，经加工形成一个40kDa的膜结合蛋白和一个31kDa称之为巨核细胞促进因子(MPF)的脱落片断并释放出细胞外，我们通常所说的间皮素指的是锚定在膜上的片段，根据其蛋白结构可以分为Region I、II、III三个区域。它一方面可以通过其GPI结构域激活NFκB、MAPK和PI3K细胞内信号通路，促进细胞增殖，抵抗细胞凋亡；另一方面与其受体CA125/MUC16相互作用导致异常的细胞粘附，促进癌细胞转移。由于间皮素在正常组织中的分布有限而在多种恶性肿瘤(间皮瘤、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、胆管癌等)中过表达，因此是一个很有潜力的肿瘤特异性治疗靶点。

目前，以间皮素为靶点的小分子药物、抗毒素已经取得了很好的效果，以此为靶点的CAR-T细胞研究也在如火如荼的展开，主要是针对胰腺癌(NCT01897415,NCT02465983)，间皮瘤(NCT01355965,NCT02414269)，肺癌和乳腺癌(NCT02414269)。