[发明专利]一种葡萄籽原花青素的提取方法

说明书

本发明涉及一种葡萄籽原花青素的提取方法。本发明克服了葡萄籽种皮中原花青素难以溶出及其提取物中原花青素聚合度高的难题，采用黑曲霉为菌种发酵葡萄籽，利用黑曲霉产生的纤维素酶、果胶酶等酶类降解葡萄籽种皮利于原花青素的溶出，采用不同体积分数的乙醇作为解吸液洗脱大孔吸附树脂，将原花青素分级，然后进行部分酸解，以利于增加提取物中原花青素低聚体的含量。本发明所得的提取物中低聚原花青素含量≥98％，其平均聚合度在2.5～3.0之间，在体内易吸收，抗氧化活性强。

技术领域

本发明属于天然产物活性物质提取领域，具体涉及一种葡萄籽原花青素的提取方法。

背景技术

原花青素(proanthocyanidins)又称为缩合单宁(condensed tannins)，是黄烷-3醇单体通过C4-C8或C4-C6位连接成一定聚合度的分子，存在形式为游离、寡聚和多聚物，其基本单元主要是儿茶素、表儿茶素、没食子酸及表儿茶素没食子酸酯等。按聚合度大小可分为低聚原花青素(简称OPC，基本单元的二、三、四聚体)和高聚原花青素(简称PPC，基本单元的聚合度大于4)。其中低聚原花青素可被人体吸收利用，且具有比其组成单元更高的抗氧化活性；高聚原花青素难以透过生物膜，不能被人体吸收利用，因此降低葡萄籽提取物中原花青素的聚合度可增加提取物的吸收利用率。

原花青素广泛分布于葡萄籽、松树皮等高等植物组织中。在植物体中原花青素具有抗生物或非生物胁迫的功能，如抗紫外线、抗病以及调节种子休眠和萌发等。一系列研究表明原花青素是一种强的抗氧化剂，其抗氧化、清除自由基的能力是VE的50倍、VC的20倍。从食品中摄取原花青素可以延缓衰老，预防动脉粥样硬化和心血管疾病如心脏病、心血管病、高血压，而且对糖尿病、帕金森病、肥胖症和癌症等有一定的药理功效。现已广泛应用于食品、化妆品和保健品等领域。

葡萄籽提取物作为一种天然存在的强效抗氧化剂，具有显著清除人体自由基的功能，其应用已经有40多年的历史，到上个世纪90年代欧美等发达国家对葡萄籽提取物的应用与开发成为热点。在此潮流的影响下，国内相关的研究也逐渐展开，近年来国内以葡萄籽提取物为原料的保健食品越来越多。由于葡萄籽提取物中功效成分含量太复杂，而且各葡萄籽提取物原料生产厂家和应用厂家对葡萄籽提取物中功效成分的认识不统一。但目前国内厂家对自己葡萄籽提取物的标注多为原花青素含量≥95％，未提到原花青素聚合度及单体的含量，经测定其产品原青花素的平均聚合度较大，一般都在8.0以上。

中国专利CN105130941A公开了一种葡萄籽提取物的制备方法，采用粉碎后的葡萄籽添加水和酵母后密封发酵，然后再用丙烷和二甲醚萃取葡萄籽油，用无水乙醇作为萃取剂进行亚临界萃取，获得原花青素提取物。中国专利CN101100464A中公开了高氧化自由基吸收能力(ORAC)的低聚原花青素及其提纯方法，所述的低聚原花青素产品含有质量百分数为45～65％的低聚原花青素，其制备方法为采用超滤膜截留相对分子量在5～100万之间的分子，制得高ORAC值的低聚原花青素。中国专利CN103910706B公开了一种低成本的低聚原花青素的制备方法，其采用冷溶、过滤、纳滤、喷雾干燥等技术，在其制备过程中采用质量浓度为4～6％的亚硫酸氢钠溶液，进行高聚原花青素的降解，取得了一定的效果。中国专利CN200510013084.3通过用截留相对分子量为5000和1000的低蛋白吸附的改性聚醚砜平板超滤膜，提纯葡萄籽提取物中的低聚原花青素，其中5000膜超滤原花青素得率为25.18％，单体儿茶素得率为74.11％；1000膜超滤原花青素得率为34.76％，单体儿茶素得率为48.58％。中国专利CN104529990A公开了一种从葡萄籽中提取原花青素的方法，其采用纤维素酶进行葡萄籽中纤维素的降解以利于种皮中原花青素溶出，得到纯度95％以上的寡聚原花青素。

在上述文献中所涉及的原花青素的提取方法中，采用酶进行纤维素的降解以利于原花青素的溶出，其成本投入较高，而且在酶解过程中需要适宜酶解的温和条件，操作较为复杂。采用超滤膜过滤提取特定分子段的原花青素过程中，目前仍还存在膜通量小、所需膜面积大、处理量少、超滤时间长、难以实现规模化工业生产等缺陷。

发明内容