[发明专利]一种无创产前亲权鉴定方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)获取孕妇外周血样本；

(2)对样本进行密度梯度离心操作；

(3)对步骤(2)处理所得细胞液进行白细胞去除处理，获得相对富集的胎儿有核红细胞悬液；

(4)对步骤(3)处理所得相对富集的胎儿有核红细胞悬液进行免疫荧光染色、固定封片、有核红细胞鉴定及捕获，获得单个有核红细胞；

(5)对步骤(4)处理所得单个胎儿有核红细胞进行单细胞扩增；

(6)步骤(5)处理所得扩增产物进行STR分型检测及亲权鉴定。

2.如权利要求1所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述密度梯度离心为双密度梯度离心。

3.如权利要求2所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述双密度具体为：1.077/1.095g/ml。

4.如权利要求1所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述密度梯度离心处理完毕，加入红细胞超聚溶液，从而获得纯净有核细胞悬液。

5.如权利要求4所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，所述红细胞超聚溶液包括但不限于以下一种或几种：HetaSep、羟乙基淀粉溶液。

6.如权利要求1所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述密度梯度离心介质包括但不限于以下任一种：Ficoll、蔗糖，(N,N'-bis(2,3-dihydroxypropyl)-5-[N-(2,3-dihydroxypropyl)acetamido]-2,4-6-triiodo-isophthalamide),OPTIPrep、Percoll。

7.如权利要求1所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，步骤(2)中，所述密度梯度离心处理后所得相对富集的胎儿有核红细胞悬液密度为1.077～1.095g/ml。

8.如权利要求1所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，步骤(3)中，所述白细胞去除采用免疫磁珠负选进行。

9.如权利要求8所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，所述免疫磁珠包被的抗体包括但不限于以下一种或几种：CD34，CD46，CD55，CD4，CD8，CD100，CD175s，HLA-DR，CD29，CD31，CD35，CD44，CD45，CD45RB，CD47，CD59，CD14，CD15，CD81，CD99，CD108。

10.如权利要求1所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，步骤(5)中，所述单细胞扩增方法包括如下步骤：细胞裂解；预扩增；终扩增。

11.如权利要求12所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，所述细胞裂解的裂解液包括第一引物。

12.如权利要求11所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，所述第一引物序列为如SEQ ID NO：1所示，具体为:ATGACTGATCCTTGTGCTAGAGTGTACNNNNNNNN，其中所述NNNNNNNN为随机引物序列或定向富集序列。

13.如权利要求12所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，所述随机引物序列或定向富集序列的长度可以为4～20nt，优选地为4～10nt，更优选地为6～8nt。

14.如权利要求12所述的一种无创产前亲权鉴定方法，其特征在于，所述终扩增的终扩增缓冲液包括第二引物，所述第二引物序列为如SEQ ID NO：2所示，具体为:ATGACTGATCCTTGTGCTAGAGTGTAC。

15.一种无创产前亲权鉴定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括包括：密度梯度离心介质、Percoll双密度梯度分离液、红细胞超聚溶液、免疫磁珠、第一随机引物、细胞裂解液。