[发明专利]绵羊B4GALNT2基因全长序列的扩增及其表达量的检测

说明书

本发明涉及分子生物学，具体公开了绵羊B4GALNT2基因全长序列的扩增及其表达量的检测。所述绵羊B4GALNT2基因全长序列的核苷酸序列或其反义核苷酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。本发明首次从体外培养的绵羊颗粒细胞的RNA中克隆到了B4GALNT2基因全长cDNA序列，并为该基因表达量检测提供方法，为绵羊B4GALNT2基因功能尤其在卵巢组织中调控排卵机制的研究奠定序列信息基础，并对了解雌性绵羊排卵数差异具有重要意义。

技术领域

本发明涉及分子生物学，具体地说，涉及绵羊B4GALNT2基因全长序列的扩增及其表达量的检测。

背景技术

B4GALNT2基因是β-1,4-N-乙酰基-半乳糖胺基转移酶2基因的简称，该基因所表达的蛋白在体内主要行使蛋白修饰的功能作用，属于蛋白糖基化通路重要组成部分；可将体内β-1,4连接的N-乙酰半乳糖胺转移至α-2,3-唾液酸化链的半乳糖残基上，完成相应抗原蛋白修饰等。

目前针对B4GALNT2基因的研究集中在绵羊繁殖性能的调控机理和多羔表型性状主效基因的挖掘。法国的肉用绵羊品系-Lacaune绵羊可通过DLX3:c.*803AG连锁突变来判断其产羔和排卵数潜能，Lacaune绵羊也被认为存在一个控制排卵数的主效基因-FecL。随后，法国农业科学院的最新研究表明：位于B4GALNT2基因第7内含子中的SNP g.36938224TA突变和与EZR基因间区的SNP g.37034573AG突变与产羔和排卵数性状紧密相关，从而推测B4GALNT2基因是控制Lacaune绵羊高繁殖力性状的主效基因。小鼠的B4GALNT2蛋白也被证明在卵丘细胞群的扩增中发挥着重要作用。因而，在未来的绵羊繁殖调控作用的研究中，B4GALNT2基因可能是重要的研究节点。

然而，现有的NCBI中的绵羊B4GALNT2基因仅公布了一个起始转录位点(登录号：NM_001318076.1)，其公布的B4GALNT2基因的3’端序列不够完整，且未通过NCBI的最终审查。该序列扩增来自于法国绵羊品种Lacaune，而本发明的序列扩增来源于中国著名的多羔绵羊品种-小尾寒羊。世界绵羊具有多个起源，绵羊群体间LD值很小，说明群体间存在较大的变异，为更加精确地研究国内绵羊品种中的B4GALNT2基因，需要建立单独的mRNA序列。未见B4GALNT2基因在各物种中的全长序列扩增，其原因可能在于该基因的3’端序列较长，且3’端RACE引物设计较为困难。

针对绵羊物种，B4GALNT2基因作为高繁殖力基因FecL的候选基因，故该基因的扩增方法以及对其表达检测的方法将为后续的研究奠定良好的基础。因此，亟需提供绵羊B4GALNT2基因全长序列的扩增方法及其表达量的检测方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供绵羊B4GALNT2基因全长序列的扩增及其表达量的检测。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

第一方面，本发明提供了绵羊B4GALNT2基因的全长序列，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

本发明针对NM_001318076.1序列，先对3’端的参考序列进行普通PCR扩增，进一步延伸后，再设计相应的3’端RACE引物，最终获得了更为完整的B4GALNT2基因3’端序列。

本发明相对于现有技术，提供了B4GALNT2基因的全长序列，尤其是B4GALNT2基因的3’端序列。miRNA在基因表达调控中扮演着重要角色，它可以通过与mRNA的3’端非翻译区作用从而在转录后水平上介导mRNA的翻译，B4GALNT2基因3’端序列的获得将有利于miRNA对其调控作用的研究。