[发明专利]一种小麦成熟籽粒总蛋白双向电泳方法

权利要求书

1.一种小麦成熟籽粒总蛋白双向电泳方法，其特征在于，该方法具体包括如下步骤：

（1）采用直接提取法提取小麦成熟籽粒总蛋白

所述小麦为郑麦366、济南17、新麦18或新麦26；

所述直接提取法，具体操作步骤如下：

①用液氮将研钵与研棒预冷，然后在预冷后研钵中加入0.3g小麦成熟籽粒材料，加入10% PVP，用液氮研磨15分钟；

②将研磨好的小麦粉盛入预冷过的2mL离心管中，加入1mL裂解液，震荡10分钟，充分混匀，使其呈透明粘稠液体状；

所述裂解液组成为：7mol/L尿素，3mol/L硫脲，质量分数4% CHAPS，0.1%蛋白酶抑制剂，0.5%的pH=3~10的两性电解质；

③用液氮冻结，37℃水溶解，反复冻融3次，期间充分涡旋；

④最后室温13000rpm离心30分钟，取上清，即为所制备的小麦成熟籽粒总蛋白的蛋白液；

（2）第一向等电聚焦

将步骤（1）中所提取小麦成熟籽粒总蛋白进行第一向等电聚焦，采用17cm的 IPG预制胶条时，胶条pH=5~8，蛋白上样量设置为500μg；

（3）第二向SDS-PAGE电泳

将步骤（2）中等电聚焦后胶条进行平衡后，进行第二向SDS-PAGE电泳；

（4）凝胶染色

对步骤（3）中电泳结束后胶条采用考马斯亮蓝进行染色；

（5）图像扫描与分析

对步骤（4）中染色后电泳胶条进行扫描获得电泳图谱，并进行分析。