[发明专利]一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺

权利要求书

1.一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺，其特征 在于具体包括混菌好氧发酵和混菌厌氧发酵二步工序，其中好氧发酵菌群包括黑曲霉、酵母菌、枯草芽孢杆菌、冷解糖芽孢杆菌；厌氧发酵菌群包括酪酸梭状芽孢杆菌和乳酸菌；其中所述好氧发酵菌群中黑曲霉、酵母菌、枯草芽孢杆菌、冷解糖芽孢杆菌的用量比为1.2:0.8:1:4；所述混菌好氧发酵和混菌厌氧发酵二步工序具体包括：

（1）预处理：选取无霉变的棉粕，粉碎过40目筛，调整棉粕含水量40～60%；

（2）配制固体培养基：向棉粕中加入3～5wt%糖蜜、2～3wt %玉米浆、1.5～2wt%尿素、1～1.5wt%硫酸铵、0.1～0.2wt%磷酸二氢钾，并加入0.5～1wt%非淀粉多糖酶，调整初始pH为6.5～7.0；

（3）好氧发酵：将黑曲霉、酵母菌、枯草芽孢杆菌、冷解糖芽孢杆菌接种至培养基，总接种量为固体培养基的2～3%，拌匀后控温35～40℃培养，通风培养24～30h；

（4）厌氧发酵：好氧发酵后停止通风，2h后接种酪酸梭状芽孢杆菌和乳酸菌，接种量分别为固体培养基的1.5～2%、1～1.5%，厌氧发酵12～16h;

（5）干燥：发酵结束后低温通风干燥；

（6）粉碎：将干燥后的发酵棉粕粉碎即得棉粕蛋白饲料；

上述步骤（2）中固体培养基无需灭菌。

2.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺，其特征在于所述酵母菌可以是产朊假丝酵母、啤酒酵母、酿酒酵母、脆壁克鲁维酵母中一种或几种的混合菌；

3.根据权利要求1-2所述的一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺，其特征在于所述酵母菌的最佳菌种为产朊假丝酵母与脆壁克鲁维酵母的混合菌，其用量比为7:3。

4.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺，其特征在于所述黑曲霉的种子液制备方法为：取新鲜麸皮，用60目筛子筛去细粉，按麸皮：水＝1：1.0～1.3比例加入水，拌匀至无干粉又无结团现象。拌匀后，分装入2000mL三角瓶中，每只2000mL三角瓶装湿麸皮约100g，在0.1MPa表压下灭菌40～60min，冷却至35℃，每一个三角瓶中接入1-2环已活化好的斜面米曲霉cv-8、黑曲霉sp-1孢子，培养基品温控制在(35±1)℃．每隔12-24h摇瓶一次，孢子长出后停止制备孢子悬浮液；然后按照上述方法接种至种子罐进行扩大培养，制备成二级种子液。

5.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺，其特征在于所述酵母菌种子液制备方法为：在无菌操作条件下，从酵母菌YDP斜面上用接种环挑取两环菌种，接种到500mL装300mLPDA液体培养基的三角瓶内，28℃～32℃，140r/min振荡培养24h后，6000r/min条件下离心15min收集菌体，并用质量浓度0.85%的无菌生理盐水洗涤酵母菌体两次，最后用无菌的生理盐水洗下酵母菌，制成酵母菌菌悬液，用血球计数板计数，控制菌悬液浓度为1×10⁸CFU/mL，冰箱保存待用。

6.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺，其特征在于所述枯草芽孢杆菌、冷解糖芽孢杆菌种子液制备方法为：在无菌条件下，采用LB培养基在28～32℃条件下培养24h，制得液体芽孢杆菌菌悬液，用血球计数板计数，控制菌悬液浓度为1×10⁸CFU/mL，冰箱保存待用。

7.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺，其特征在于所述酪酸梭状芽孢杆菌和乳酸菌的种子液制备方法为：将斜面或甘油管保藏菌种截至相应的种子培养基，其中酪酸梭状芽孢杆菌接种至LB培养基，乳酸菌菌种接种至MRS培养基中，37℃静置培养20～30h得到一级种子液；然后将一级种子液接种到10L的玻璃瓶种子发酵罐中，37℃发酵20～30h得到二级种子液。

8.根据权利要求1所述的一种利用微生物发酵法提高棉粕饲用营养价值的工艺，其特征在于所述乳酸菌可以是嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌中的一种或几种的混合。