[发明专利]VP2基因和NP基因重组腺病毒及其应用

权利要求书

1.一种VP2基因和NP基因重组腺病毒，其特征在于是由以下方法制备的：

1)从IBDV中扩增出VP2基因；从AIV的SD株中扩增出NP基因；

2)将获得的目的基因亚克隆到腺病毒穿梭载体质粒pDC315-MCS-EGFP上，获得重组穿梭载体pDC315-VP2-NP-EGFP；

3)将重组穿梭载体pDC315-VP2-NP-EGFP与腺病毒大骨架质粒pBHGlox E1,3Cre共转染HEK293细胞，重组并包装获得重组腺病毒pBH-VP2-NP-EGFP。

2.根据权利要求1所述的一种VP2基因和NP基因重组腺病毒，其特征在于步骤1)中VP2基因的扩增包括以下操作：以序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的DNA片段分别作为正向引物和反向引物，以IBDV的总RNA为模板，RT-PCR扩增获得VP2基因。

3.根据权利要求1所述的一种VP2基因和NP基因重组腺病毒，其特征在于步骤1)中NP基因的扩增包括以下操作：以序列为SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的DNA片段分别作为正向引物和反向引物，以AIV的RNA为模板，RT-PCR扩增获得NP基因。

4.根据权利要求2或3所述的一种VP2基因和NP基因重组腺病毒，其特征在于所述RT-PCR的反应体系如下：One step PrimeScript Enzyme Mix 2μL，2×step buffer 12.5μL，正向引物1μL，反向引物μL，RNA polymerase 1.5μL，用RNase-free ddH₂O补齐至25μL。

5.根据权利要求4所述的一种VP2基因和NP基因重组腺病毒，其特征在于所述RT-PCR的反应条件如下：94℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火40s，72℃延伸1min，如此32个循环；72℃延伸10min。

6.根据权利要求1所述的一种VP2基因和NP基因重组腺病毒，其特征在于步骤2)中是先是将目的基因经T-A克隆至pMD19-T载体上；经酶切及测序鉴定后与穿梭载体pDC315-MCS-EGFP连接。

7.权利要求1～3任一项所述重组腺病毒用于制备预防禽传染性法氏囊病和禽流感的生物制品中的应用。