[发明专利]一种绞股蓝提取物及其制备工艺与检测方法与用途

权利要求书

1.一种绞股蓝提取物，其特征在于，该绞股蓝提取物是采用如下方法制备的：

(1)将绞股蓝置烘箱内25℃～35℃烘干，采用气流粉碎机对干燥的绞股蓝进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为700～900kPa，进料量为400～600g，分选频率为35～45Hz，粉碎时间为15～25min，得绞股蓝超微粉A；

(2)取步骤(1)所得绞股蓝超微粉A，加入10～20倍量pH为9～11的氨水溶液，微波提取，微波功率400～600W，提取时间35～45min，提取温度55～65℃，提取液滤过，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏B；

(3)取步骤(2)所得浸膏B进行柱层析分离，选用H-60型大孔吸附树脂树脂，柱径高比为1:8～12，上样体积10～14BV，水洗8～12BV除杂，再用50％的乙醇溶液洗脱8～12BV除杂，再以乙酸乙酯：1％冰醋酸溶液＝80:15～25的洗脱剂10～14洗脱，流速为0.5～1.5BV·h-1，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。

2.如权利要求1所述的绞股蓝提取物，其特征在于，该绞股蓝提取物是采用如下方法制备的：

(1)将绞股蓝置烘箱内30℃烘干，采用气流粉碎机对干燥的绞股蓝进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为800kPa，进料量为500g，分选频率为30Hz，粉碎时间为20min，得绞股蓝超微粉A；

(2)取步骤(1)所得绞股蓝超微粉A，加入15倍量pH为10的氨水溶液，微波提取，微波功率500W，提取时间40min，提取温度60℃，提取液滤过，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏B；

(3)取步骤(2)所得浸膏B进行柱层析分离，选用H-60型大孔吸附树脂树脂，柱径高比为1:10，上样体积12BV，水洗10BV除杂，再用50％的乙醇溶液洗脱10BV除杂，再以乙酸乙酯:1％冰醋酸溶液＝80:20的洗脱剂12BV洗脱，流速为1BV·h-1，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。

3.一种绞股蓝提取物的检测方法，该绞股蓝提取物是采用如下方法制备的：

(1)将绞股蓝置烘箱内30℃烘干，采用气流粉碎机对干燥的绞股蓝进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为800kPa，进料量为500g，分选频率为30Hz，粉碎时间为20min，得绞股蓝超微粉A；

(2)取步骤(1)所得绞股蓝超微粉A，加入15倍量pH为10的氨水溶液，微波提取，微波功率500W，提取时间40min，提取温度60℃，提取液滤过，滤液浓缩成浸膏，得到浸膏B；

(3)取步骤(2)所得浸膏B进行柱层析分离，选用H-60型大孔吸附树脂树脂，柱径高比为1:10，上样体积12BV，水洗10BV除杂，再用50％的乙醇溶液洗脱10BV除杂，再以乙酸乙酯:1％冰醋酸溶液＝80:20的洗脱剂12BV洗脱，流速为1BV·h-1，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得；

其特征在于，采用高效液相色谱法测定绞股蓝提取物中绞股蓝皂苷A、人参皂苷Rb1的含量，步骤如下：

(1)色谱柱：C18色谱柱，以0.5～1.5％冰醋酸溶液-乙腈为流动相，梯度洗脱，洗脱顺序为：从0min到15min，1％冰醋酸溶液从10％线性上升至25％，乙腈从90％线性下降至75％，从16min到25min，1％冰醋酸溶液从25％线性上升至45％，乙腈从75％线性下降至55％，从26min到45min，1％冰醋酸溶液从45％线性上升至75％，乙腈从55％线性下降至25％；检测波长：365～375nm；流速：1.0～2.0mL·min-1；柱温：25～35℃；理论塔板数按人参皂苷Rb1峰计算应不低于3500；

(2)对照品溶液的制备：精密称取绞股蓝皂苷A对照品，以55％～65％甲醇制成每1mL含80～120μg的绞股蓝皂苷A对照品溶液；精密称取人参皂苷Rb1对照品，以55％～65％甲醇制成每1mL含80～120μg的人参皂苷Rb1对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：取本品粉末20～30mg，精密称定，置100mL量瓶中，加入55％～65％甲醇70～90mL，超声处理25～35min，超声功率为250～350W，超声频率为55～65KHz，超声温度为40～50℃，放冷，加55％～65％甲醇至刻度，混匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

(4)测定：分别精密吸取上述溶液各5～20μL，注入液相色谱仪，测定，即得。