[发明专利]一种蛋白质等电聚焦电泳方法及其配胶装置

说明书

本发明公开了一种蛋白质等电聚焦电泳方法及其配胶装置，属于生物分离检测技术领域。该方法包括配胶、灌胶、预电泳、电泳、以及凝胶固定、脱色、染色等步骤，本发明的方法通过改变样品的上样方式和预电泳与电泳的电压和电泳时间，使得得到的蛋白质电泳条带清晰、分离度好、不扩散不拖尾，有效解决了现有技术电泳时间长、蛋白扩散拖尾等问题，大大提高了配胶成功率。本发明的配胶装置包括配胶支架、固定架、配胶玻璃、垫片和防漏垫等部件，本发明通过改良配胶装置的结构，不仅使得试剂消耗量降低，而且灌胶迅速且不产生气泡，聚胶均匀，大大提高了配胶成功率的同时还降低了检验成本。

技术领域

本发明涉及生物分离检测技术领域，具体涉及一种蛋白质等电聚焦电泳方法及其配胶装置。

背景技术

等电聚焦电泳(IEF)是两性电解质在电泳场中(常用聚丙烯酰胺凝胶)形成一个pH梯度，由于蛋白质为两性物质，其所带电荷与介质的pH值有关，带电的蛋白质在电泳中向极性相反的方向迁移，当迁移到达其等电点(PI)的pH处，此时，该蛋白质不再带有净的正或负的电荷，电流达到最小，不再移动，形成一个很窄的区带，从而达到检测蛋白质类和肽类供试品等电点的电泳方法。目前，常规的等电聚焦电泳方法存在以下问题：1、IEF电泳常出现蛋白扩散、拖尾、烧胶等不良现象，需增加检验次数，耗时长，造成人力财力物力浪费；2、现有的IEF配胶装置配胶面积大，灌胶易产生气泡，聚胶不均，胶薄易裂，操作难度大，成功率低，多次配胶造成耗材严重浪费；3、目前IEF的配胶装置胶垫仅为0.3mm，配胶操作难度大，难以一次性成功，导致每次检验至少有50％的胶面积被浪费，加上配胶试剂昂贵，由此造成IEF检验成本居高不下。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种蛋白质等电聚焦电泳方法及其配胶装置，通过该方法得到的蛋白质电泳条带清晰、分离度好、不扩散不拖尾，有效解决了现有技术电泳时间长、蛋白扩散拖尾等问题，大大提高了配胶成功率。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种蛋白质等电聚焦电泳方法，其包括以下步骤：

A、配胶、灌胶：将30％丙烯酰胺溶液、两性电解质溶液和纯化水混合后，用超声波脱气5～10min；灌胶前加入10％过硫酸铵和TEMED，混匀后向配胶装置的配胶玻璃灌胶；

B、预电泳：凝胶聚合后清除玻璃板上的残胶，将胶贴在薄玻璃片上，胶与玻璃片之间不能有气泡，将贴有凝胶的薄玻璃片放在温度为8～12℃的冷却板上，当凝胶的温度到达8～12℃时，在凝胶左边放上用负极液润湿的电极条，右边放上用正极液润湿的电极条，将电极对准电极条的中心，正极与负极分别与电泳槽的正、负极连接，盖上安全罩，将正、负极与电源连接，进行预电泳，预电泳电压为100V，预电泳时间为10min；

C、电泳：预电泳结束后，取下电极板，用微量移液器直接加供试品溶液2～3μl，标准品上样量为2～3μl，加供试品后按预电泳步骤操作，电泳电压为900～1000V，电泳时间为40min；当标准品有色条带移至电极条边时，停止电泳；

D、固定：取出凝胶，先将凝胶固定至少20min，然后滴加脱色液脱色20～30min，再滴加染色液染色40～60min，再滴加脱色液脱色直至背景无色后，将凝胶浸泡在保存液中，采用凝胶扫描仪分析等电点，做成干胶永久保存。

作为本发明优选的实施方式，所述步骤B中的负极液为0.2mol/L氢氧化钠溶液，正极液为0.5mol/L磷酸溶液。

作为本发明优选的实施方式，所述步骤D中的固定液为三氯醋酸、磺基水杨酸与纯化水的混合溶液，脱色液为乙醇、冰醋酸和纯化水的混合溶液，染色液为考马斯亮蓝G250与脱色液的混合溶液。

作为本发明优选的实施方式，所述步骤D中的保存液是由甘油和脱色液组成混合溶液。