[发明专利]一种蛋白质等电聚焦电泳方法及其配胶装置

权利要求书

1.一种蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：包括以下步骤：

A、配胶、灌胶：将30%丙烯酰胺溶液、两性电解质溶液和纯化水混合后，用超声波脱气5~10min；灌胶前加入10%过硫酸铵和N,N,N’,N’-四甲基乙二胺，混匀后向配胶装置的配胶玻璃灌胶；

B、预电泳：凝胶聚合后清除配胶玻璃上的残胶，将胶贴在薄玻璃片上，胶与玻璃片之间不能有气泡，将贴有凝胶的薄玻璃片放在温度为8~12℃的冷却板上，当凝胶的温度到达8~12℃时，在凝胶左边放上用负极液润湿的电极条，右边放上用正极液润湿的电极条，将电极对准电极条的中心，正极与负极分别与电泳槽的正、负极连接，盖上安全罩，将正、负极与电源连接，进行预电泳，预电泳电压为100V，预电泳时间为10min；

C、电泳：预电泳结束后，取下电极板，用微量移液器直接加供试品溶液2~3μl，标准品上样量为2~3μl，加供试品后按预电泳步骤操作，电泳电压为900~1000V，电泳时间为40min；当标准品有色条带移至电极条边时，停止电泳；

D、固定：取出凝胶，先将凝胶固定至少20min，然后滴加脱色液脱色20~30min，再滴加染色液染色40~60min，再滴加脱色液脱色直至背景无色后，将凝胶浸泡在保存液中，采用凝胶扫描仪分析等电点，做成干胶永久保存；

所述蛋白质等电聚焦电泳方法是基于配胶装置实现的，所述配胶装置包括：固定架、配胶支架、配胶玻璃、防漏垫和两个垫片；所述配胶支架包括连接板、第一固定块和第二固定块，所述第一固定块和第二固定块分别设置在所述连接板的左侧和右侧，所述第一固定块和第二固定块在同一侧上分别设置有用于所述配胶玻璃的卡槽；所述配胶玻璃插接在所述卡槽内，所述配胶玻璃包括第一玻璃片和第二玻璃片，所述第一玻璃片与第二玻璃片相互叠合，两个所述垫片设置在所述第一玻璃片与第二玻璃片之间，使得第一玻璃片与第二玻璃片之间形成用于灌胶的间隙；所述固定架上设置有至少一个与所述配胶支架相匹配的卡位，所述配胶支架卡接于所述卡位上；所述卡位上设置有凹槽，所述防漏垫设置在所述凹槽上。

2.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：所述步骤B中的负极液为0.2mol/L氢氧化钠溶液，正极液为0.5mol/L磷酸溶液。

3.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：所述步骤D中的固定液为三氯醋酸、磺基水杨酸与纯化水的混合溶液，脱色液为乙醇、冰醋酸和纯化水的混合溶液，染色液为考马斯亮蓝G250与脱色液的混合溶液。

4.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：所述步骤D中的保存液是由甘油和脱色液组成混合溶液。

5.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：所述第一玻璃片的长度等于第二玻璃片的长度；所述第一玻璃片的宽度小于所述第二玻璃片的宽度。

6.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：所述第一玻璃片的长度为8~12cm、宽度为4.5~7.5cm；所述第二玻璃片的长度为8~12cm、宽度为5~8.5cm。

7.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：所述垫片的厚度为0.1~0.6mm。

8.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：所述垫片由软质材料制成的；所述软质材料选自硅胶、聚氨酯、聚氯乙烯、聚四氯乙烯、聚偏氯乙烯中的一种。

9.根据权利要求1所述的蛋白质等电聚焦电泳方法，其特征在于：所述固定架包括底座和基座，所述基座固定设置在所述底座的中间位置上，所述基座的左右两侧分别向外延伸有固定片，所述基座的前后两侧上设置有倾斜凸片；所述卡位设置在底座上且位于所述基座的前侧或后侧上。