[发明专利]一种胃蛋白酶制备苦味肽的方法及苦味肽的应用

说明书

本发明公开了一种胃蛋白酶制备苦味肽的方法，包括：制备上清液；酶水解制备苦味肽粗液；饱和透明质酸配制；通过非牛顿流体分离制备苦味肽粗浓缩液。该方法分离或者去除苦味肽的效果好，简单易操作；所分离出的苦味肽可用于哮踹，心血管疾病的预防。

技术领域

本发明属于水产品深加工领域，具体涉及一种胃蛋白酶制备苦味肽的方法及应用。

背景技术

由于苦味一般与毒性和药性相关，其不适的口感使人避之，但苦味也是人类长期进化适应生存的方式最重要的元素之一。食品苦味主要来源于蛋白水解肽所暴露的疏水性氨基酸基团。虽然苦味在食品中不易被接受，但在医学上却有广泛的应用，如许多苦味肽具有血管紧张素酶抑制作用。此外，苦味受体既存在于舌蕾细胞中，而且也存在于肺气管及肺支气管上皮细胞中，近年发现食源性苦味分子可成为肺气管和支气管上皮细胞苦味受体激动剂，从而可能用于抗哮喘药物的制备。鱼蛋白经酶水解后其溶解性、热稳定性以及营养特性都会得到极大地改善，然而由于疏水性氨基酸的暴露及空间结构的改变形成苦味肽，所以无论食品或者功能食品，或者药品的生产时常常需要分离苦味肽，或者去除苦味肽。虽然目前分离或者脱苦味方法很多，但通常带入很多副作用，比如最早使用的在酶解液中加入活性炭来进行选择性分离，会带入活性炭的特殊气味。而非常规方法则需要昂贵的仪器和繁琐的程序，从而限制食品或者功能食品的商业化程度。

透明质酸是一种食品添加剂，近年发现透明质酸具有许多新的生物学功能。比如，透明质酸被发现是动物细胞的CD44跨膜受体之配体，透明质酸调节许多正常细胞的活动，但也参与癌细胞的浸润和转移，与此同时由于癌细胞高表达透明质酸酶，故被用来药物的定向和缓释投递。透明质酸是一种从细菌到哺乳细胞内广泛存在的大分子多糖类物质，其分子量变化从几千至高达上百万，但对人体仍无抗原原性。透明质酸的生理功能和应用特性与其分子量、分子量分布等分子参数密切相关。此外，高锁水性使透明质酸显示非牛顿流体和粘弹性行为，其体内、体外流变学也正在受到广泛研究，许多新的应用正在开发，现已广泛用于药物缓释投递，用于癌细胞相当高表达的透明质酸酶的降解作用。近年，通过透明质酸的发酵制备，已广泛用于食品与化妆品等领域。透明质酸的早期制备是从鸡冠，或者动物一些器官制备，现在由于可以发酵生产，所以透明质酸得以进入食品领域。虽然人们对其物性还不是很清楚，但透明质酸的许多神奇效果、功能正在食品研究与制造中被发掘。现在透明质酸的非牛顿流体特性也被广泛用于骨关节炎及癌细胞的定向药物投递的研究，然而体外透明质酸的非牛顿流体物理特性以及与蛋白/肽的物理化学作用机理的了解仍然不清楚。除透明质酸分子量外，其温度，浓度和某些媒介分子等都影响其粘度和流变学性质，进而影响苦味肽的富集或者消除。

因此，有必要研究一种更有利的筛选苦味肽的方法。

发明内容

本发明目的是提供一种胃蛋白酶制备苦味肽的方法，解决上述问题。

本发明的技术方案是：

一种胃蛋白酶制备苦味肽的方法，该方法包括如下步骤：

(1)制备上清液：清洗大黄鱼，然后去鳞，再用去离子水清洗后，将所述大黄鱼切成鱼块，将所述鱼块与缓冲液放入高速组织捣碎机中打浆并离心，取上清液加热至内源性酶失活，备用；

(2)酶水解制备苦味肽粗液：在所述上清液中加入质量浓度为10g/L的胃蛋白酶，混合搅拌均匀，置于水浴锅中，将pH调至3.5，然后酶解、冷却，调回pH至7.0，定容，离心，上清液即为苦味肽粗液，取所述苦味肽粗液备用。

(3)饱和透明质酸配制：将透明质酸钠盐加入至装有无菌水的器皿中，充分搅拌至形成透明粘性液体,在器皿口覆盖保鲜膜。

(4)通过非牛顿流体分离制备苦味肽粗浓缩液：在容器中加入所述苦味肽粗液，再加入与所述苦味肽粗液等体积的透明粘性液体，此时溶液的上层为所述透明粘性液体，下层为所述苦味肽粗液，将所述溶液经过离心或者静置的离心管收集组分，然后通过感官评定确定苦味肽的组分位置，收集苦味肽组分，获得苦味肽粗浓缩液。