[发明专利]一种检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合及试剂盒与应用

说明书

一种检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合及试剂盒与应用，属于生物医学检验技术领域。本发明提供的检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合能特异地检测出宫颈癌相关基因的甲基化，利用该核酸组合制备检测细胞基因甲基化的试剂盒，有效提高检测的精度，能方便快捷的应用于检测宫颈癌相关基因的甲基化水平，具有较高的灵敏度和特异性；应用该试剂盒可以方便检测，提高检测效率和检测的精度，方便进行定量检测，且操作简单，利于推广应用。

技术领域

本发明涉及生物医学检验技术领域，且特别涉及一种检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合及试剂盒与应用。

背景技术

目前应用最广泛的宫颈癌筛查方法遵循三阶梯式诊断方法，主要内容为：初筛，细胞学(液基)、VIA/VILI检查、高危型HPV检测(HR-HPV)或16/18分型；阴道镜：宫颈管诊断性刮宫或锥切，多点活检；以及病理学诊断(即金标准)。然而，这些方法均存在自身的局限性，影响了筛查的效果。液基细胞学检查的局限性表现在。(1)敏感性较低，有研究显示，细胞学检查在初筛过程中遗漏了约有一半的CIN2、CIN3及宫颈癌患者，常造成对患者的漏诊漏治；(2)细胞学涂片的取材、制片、阅片水平参差不齐，缺乏规范化的质量控制，主观依赖性强。高危型HPV检测的局限性表现在：(1)高危型HPV的终生感染风险为80％，HPV检测虽能提高灵敏度，但无法区分一过性HPV感染和致病性持续感染；(2)育龄期妇女，尤其是年龄小于30岁的女性HPV的感染率高，临床提示意义较弱。单一依赖HPV筛查，其较低的特异性易造成有限的社会、医疗资源的浪费及对患者的过度治疗。

发明内容

本发明的第一目的在于提供检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合，该核酸组合能特异的、高灵敏度检测细胞基因甲基化。

本发明的第二目的在于提供上述的检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合在制备检测细胞基因甲基化的试剂盒中的应用。

本发明的第三目的在于提供一种检测宫颈细胞基因甲基化的试剂盒，可以方便的应用到基因甲基化的检测中。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

一种检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合，核酸组合包括检测引物对和检测探针；检测引物对包括用于检测SOX1基因甲基化的第一引物对和用于检测PAX1基因甲基化第二引物对；第一引物对的碱基序列如SEQ ID NO.1-2所示；第二引物对的碱基序列如SEQ IDNO.3-4所示；检测探针5'端标记有荧光基团，检测探针的3'端标记有淬灭基团；检测探针包括检测SOX1基因的第一探针和PAX1基因检测的第二探针，第一探针的碱基序列如SEQ IDNO.5所示；第二探针的碱基序列如SEQ ID NO.6所示。

提供上述的检测细胞基因甲基化的核酸组合在制备检测细胞基因甲基化的试剂盒中的应用。

本发明还提供一种检测宫颈细胞基因甲基化的试剂盒，包括上述的检测细胞基因甲基化的核酸组合。

本发明的有益效果是：本发明提供的检测细胞基因甲基化的核酸组合能特异地检测出相关基因的甲基化，利用该核酸组合制备检测细胞基因甲基化的试剂盒，有效提高检测的精度，能方便快捷的应用于检测相关基因的甲基化水平，具有较高的灵敏度和特异性；应用该试剂盒可以方便检测，提高检测效率和检测的精度，方便进行定量检测，且操作简单，利于推广应用。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为本发明实验例1提供的检测灵敏度结果图；

图2为本发明实验例2提供的ROC曲线图；

图3为本发明实验例3提供的SOX1基因扩增线性图；