[发明专利]植物缩合单宁高聚体的提取方法

说明书

本发明提供了一种植物缩合单宁高聚体的提取方法，包括下述步骤：将清洗干净的植物样品冷冻干燥处理后粉碎研磨，然后加入70％丙酮水溶液，超声提取、离心及旋转蒸发处理后，再将提取的单宁粗提液萃取去脂，剩余水相部分去除有机溶剂后再冷冻干燥处理,得到的单宁粗提物溶于水后置于第一色谱柱，依次采用蒸馏水、60％甲醇溶液、100％甲醇溶液和70％丙酮溶液冲洗，收集70％丙酮的洗脱液置于第二色谱柱，采用三种不同比例组成的丙酮、甲醇和水的混合液洗脱三次，分别收集各次洗脱液，即得到不同聚合度峰值的缩合单宁高聚体。本发明可有效提纯植物体中高聚合度的缩合单宁，为目前大分子植物多酚的结构与活性研究领域提供了新的途径。

技术领域

本发明涉及植物单宁的提取纯化方法，具体涉及一种利用植物提取缩合单宁高聚体的方法。

背景技术

植物多酚(Plant polyphenols)，又称植物单宁(Vegetable tannins)，结构复杂多样，种类繁多，根据化学结构的不同，可以分为缩合单宁(Condensed tannins)、水解单宁(Hydrolysable tannins)、间苯三酚单宁(Phlorotannins)及共同含有缩合单宁和水解单宁结构单元的复杂单宁(Complex tannins)等聚合体大分子多酚，以及黄酮类物质(Flavonoids)、酚酸(Phenolic acids)等小分子多酚。

植物单宁具有的与蛋白质(酶)、多糖、生物碱等生物大分子及重金属盐络合形成复合物的特性，被认为是其在生物地球化学循环中的主要作用机理。具有还原性和捕捉自由基的活性，是其具有抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗癌症等生理活性的主要作用机理。

目前关于植物多酚的研究主要集中在食品、生化、医药等领域的小分子多酚，针对大分子多酚，尤其是单宁高聚物的研究较为缺乏。虽然已有研究报告揭示，聚合度是影响缩合单宁化学与生物活性的因素，聚合度越高的植物单宁可能拥有更高的生物活性。但由于现有分离纯化技术的不足，获得聚合度大于5的缩合单宁仍然很困难，大分子植物多酚(单宁聚合度越大，分子量越大)的研究应用一直受到限制。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供了一种适用于植物的缩合单宁高聚体的提取方法，能有效提纯植物体中高聚合度的缩合单宁。

本发明提供的植物缩合单宁高聚体的提取方法，包括下述步骤：

S1将植物样品清洗干净，冷冻干燥处理后粉碎研磨；

S2在研磨后的所述植物样品中加入70％丙酮水溶液，然后提取单宁粗提液；

S3将所述单宁粗提液萃取去脂，剩余水相部分去除有机溶剂后，再进行冷冻干燥处理,得到单宁粗提物；

S4将所述单宁粗提物溶于水后置于第一色谱柱，依次采用蒸馏水、60％甲醇溶液、100％甲醇溶液和70％丙酮溶液进行冲洗；

S5收集S4步骤中70％丙酮冲洗的全部洗脱液，置于第二色谱柱，采用三种不同比例组成的丙酮、甲醇和水的混合溶液洗脱三次，分别收集各次洗脱液，即得到不同聚合度峰值的缩合单宁高聚体。

上述本发明步骤中，所述步骤S1中的植物样品清洗干净后的冷冻干燥处理的温度在-40至-50℃之间，处理时间大于72h。

上述本发明步骤中，所述步骤S1中的植物样品与70％丙酮水溶液的质量体积比为0.2g/mL；所加入的70％丙酮水溶液中含有0.25％的抗坏血酸。

上述本发明步骤中，所述步骤S2在研磨后植物样品中加入70％丙酮水溶液后，采用超声提取、离心处理得到上清液，然后通过旋转蒸发处理去除丙酮，得到单宁粗提液。

进一步地，所述超声提取、离心处理步骤中的超声提取时间为30min-40min，每次超声提取混合物的离心速率为19000g-20000g，旋转蒸发处理去除丙酮的温度低于30℃，处理过程重复至少三次。