本申请公开了一种抗Claudin18.2重组单克隆抗体及其制备与应用,属于生物技术领域。该抗Claudin18.2重组单克隆抗体是以SEQ ID NO.1所示的人工合成多肽作为免疫原,免疫新西兰大白兔并经细胞分选和有限稀释等步骤获得,包括重链可变区及轻链可变区,相比市售的抗人Claudin18.2单克隆抗体,本申请提供的重组单克隆抗体,与Claudin18.2蛋白具有更高亲和力,可高特异性和高灵敏度地识别和检测肿瘤细胞或免疫细胞上Claudin18.2蛋白的表达,可应用于免疫组织化学、间接ELISA、流式细胞术等检测与筛查领域,有利于获得更准确的检测和评估结果,并降低检测成本和背景信号的干扰。