[发明专利]一种肺癌诊断的标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，涉及一种肺癌诊断的标志物及其应用，具体涉及一种肺癌诊断的标志物UHRF1基因及其应用。

背景技术

流行病学指出肺癌是发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤之一，世界上因肿瘤致死的原因当中，肺癌位列第一位。非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)约占已确诊的原发性肺癌总体的85％，小细胞肺癌(SCLC)约占肺癌的20％-25％。近年来，科研工作者越来越重视肿瘤分子生物学的研究，发现了很多肿瘤标志物可提示肿瘤的来源和组织学类型。肿瘤标志物检测在肺癌的筛查、诊断、疗效检测和预后判断等方面有着重要的临床价值。

UHRF1基因编码的蛋白为RING指型E3泛素连接酶亚科的成员，该蛋白与特定的DNA序列结合，募集组蛋白脱乙酰酶以调控基因表达。UHRF1基因在细胞周期的G1期达到最高，并在细胞周期的G2期和M期继续表达。它在G1/S转换中和p53依赖性DNA损伤检查点中起作用，被认为是表观遗传信息整合的中枢蛋白质。UHRF1基因在多种癌症中上调，因此被认为是治疗靶标。

CN 10588660 A公开了一种基因标志物，该基因标记物是UHRF1，UHRF1可用于判断受试者是否具有患子宫内膜癌的风险或者判断受试者是否患有子宫内膜癌。CN 102305747 A公开了一种用于检测乳腺癌状态的生物标记物试剂，所述生物标记物试剂为人UHRF1基因，该生物标记物试剂UHRF1基因与乳腺癌的远处转移能力密切相关，可以利用UHRF1基因作为预测乳腺癌远处转移能力的生物标志物。但上述专利都没有公开UHRF1基因与肺癌相关。

目前市场上肺癌的基因检测产品涉及较多的是EGFR、KRAS、BRAF、ALK、MET等基因，基本上不包含UHRF1基因，也没有任何的现有技术公开UHRF1基因与肺癌相关。肺癌的发生发展与基因变异密切相关，因此，迫切需要寻找准确性高且特异性强的肺癌诊断标志物。

发明内容

本发明为了克服上述方法的缺陷，提供一种肺癌诊断的标志物及其应用，所述UHRF1基因是一种敏感性和特异性均很高的肺癌肿瘤标志物，能较好地对肿瘤做出诊断和鉴别，做到早发现、早治疗及延长患者的无进展生存期。

为达到此发明的目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种肺癌诊断标志物，所述肺癌诊断标志物为UHRF1基因。

本发明中，发明人采用免疫组织化学的方法分析378名中国肺癌患者获得的手术标本，意外发现，UHRF1基因在肿瘤细胞核中特异性染色，而在其他细胞中不染色，因此，UHRF1基因表达可用于肺癌的病理诊断。

第二方面，本发明提供如第一方面所述的肺癌诊断标志物用于制备筛选肺癌的诊断和/或治疗药物中的应用。

第三方面，本发明提供如第一方面所述的肺癌诊断标志物用于制备肺癌的检测试剂中的应用。

根据本发明，所述检测试剂还包括用于免疫组化法和/或PCR法检测生物标志物UHRF1基因的相关试剂。

第四方面，本发明提供一种肺癌诊断用试剂盒，所述试剂盒包括一种或多种特异性检测UHRF1基因表达水平的引物和/或探针。

根据本发明，所述试剂盒包括利用实时定量PCR法检测UHRF1基因的引物，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示：

上游引物(SEQ ID NO.1):5'-CCA GCA GAG CAG CCT CAT C-3'；

下游引物(SEQ ID NO.2):5'-TCC TTG AGT GAC GCC AGG A-3'.

根据本发明，所述试剂盒还包括GAPDH内参基因引物，所述GAPDH内参基因引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示：

上游引物(SEQ ID NO.3):5'-CAG GAG GCA TTG CTG ATG AT-3'；

下游引物(SEQ ID NO.4):5'-GAA GGC TGG GGC TCA TTT-3'.

优选地，所述试剂盒还包括缓冲液、dNTPs和DNA聚合酶。

第五方面，本发明提供一种如第四方面所述的试剂盒用于制备肺癌诊断试剂的应用。

第六方面，本发明提供一种UHRF1基因的检测方法，所述检测方法包括使用如第四方面所述的试剂盒。

根据本发明，包括如下步骤：

(1)采集待检样本，进行免疫组化检测和/或使用如权利要求5或6所述试剂盒中的引物进行qRT-PCR扩增；