[发明专利]鉴定生物样品中定量细胞组成的方法

权利要求书

1.用于针对来自哺乳动物的生物样品产生嗜中性粒细胞血象的试剂盒，其包括用于实施包含以下步骤的方法的材料，所述材料包括寡核苷酸和归一化标准物：使用所述寡核苷酸在表观遗传学上检测生物样品中的血细胞，以及使用所述归一化标准物定量所检测的所述血细胞，其中所述归一化标准物为核酸分子，其包含对待检测的嗜中性粒细胞(nGRC)特异的至少一种标志物区域，以及为细胞非特异的至少一种对照区域，其中所述标志物区域和所述对照区域以相同拷贝数存在于所述分子和/或已知组成的天然血细胞样品中；以及其中所述在表观遗传学上检测包括确定SEQ ID No:518或686任一个的序列内至少一个CpG位点的亚硫酸氢盐转化，其中与非嗜中性粒细胞相比，基因区域中至少一个CpG位点的亚硫酸氢盐转化指示嗜中性粒细胞，其中所述至少一个CpG位点选自如SEQ ID No:685所示的扩增子的CpG位点26、48、103、206、251和263。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其中所述至少一个CpG位点选自CpG位点206和251。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其中所述生物样品选自哺乳动物体液，组织样品和器官样品。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其中所述生物样品选自外周血样品、毛细管血样品或静脉血样品或其亚组分。

5.如权利要求3所述的试剂盒，其中所述生物样品选自血块和干血斑。

6.如权利要求3所述的试剂盒，其中所述生物样品选自干燥的、冷冻的、包埋的、保存的和新鲜的体液或组织样品。

7.如权利要求1或2所述的试剂盒，其中所述确定包括使用选自以下的方法：特异性酶消化或染料排除技术、亚硫酸氢盐测序、下一代测序、纳米孔测序、单分子实时测序、使用对亚硫酸氢盐-转化的DNA特异的引物、使用对亚硫酸氢盐-转化的DNA特异的阻断寡核苷酸、使用荧光标记的淬灭的寡核苷酸探针，使用对亚硫酸氢盐-转化的DNA特异的单核苷酸引物延伸的引物、数字或定量PCR分析、以及特异性选择性核酸和/或染色质沉淀。

8.如权利要求1或2所述的试剂盒，其中所述方法还包括将产生的所述嗜中性粒细胞血象与选自以下的全部或至少一种细胞类型相区分：嗜碱性粒细胞(bGRAN)、嗜酸性粒细胞(eGRAN)、单核细胞(MOC)、CD3⁺CD4⁺T细胞(THC)、细胞毒性CD3⁺CD8⁺T细胞(CTL)、CD3^-自然杀伤细胞(NKC)、CD3⁺自然杀伤细胞(NKT)和B-淋巴细胞(BLC)。

9.如权利要求1或2所述的试剂盒，其中所述方法还包括通过将所产生的所述嗜中性粒细胞血象与取自同一哺乳动物更早期样品的嗜中性粒细胞血象和/或与对照样品的嗜中性粒细胞血象进行比较，在所鉴定的所述生物样品中监测所述嗜中性粒细胞血象的步骤。

10.用于鉴定化学物质或生物物质对嗜中性粒细胞的影响的非诊断目的的方法，其包括对从用所述物质处理的哺乳动物获得的血样实施权利要求1至9中任一项所述的方法，以及将所述样品中的嗜中性粒细胞与未处理样品的嗜中性粒细胞进行比较。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述试剂盒包含：a)亚硫酸氢盐试剂，以及b)用于分析选自SEQ ID No:685的区域中的CpG位点的CpG位点甲基化状态的引物和探针。

12.如权利要求10或11所述的方法，其中所述天然血细胞样品为已知细胞组成的血样和/或已知血细胞类型和免疫细胞类型组成的血样。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述天然血细胞样品为提前制备的。