[发明专利]检测CRLF2基因的方法和引物

说明书

本发明公开了一种检测与急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL)有关的细胞因子受体样因子2(cytokine receptor‑like factor 2，CRLF2)基因突变的引物和方法，其包括扩增检测全外显子序列的8对引物；采用Sanger测序技术和测序引物。本发明可快速地将CRLF2基因全外显子及相关的突变检测出来。利用本发明完成的检测结果准确，可以预测ALL患者的预后并为治疗提供依据。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测与急性淋巴细胞白血病有关的CRLF2基因突变的引物和方法。

背景技术

急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是由于原始及幼稚淋巴细胞在造血组织异常增殖并浸润全身各组织脏器的一种造血系统恶性克隆性疾病。ALL的发病率高，且治疗缓解率低，复发率及死亡率高，是严重威胁患者生命健康的恶性肿瘤。研究发现细胞遗传学改变在ALL的发病中起重要作用，60％-85％的ALL具有克隆性染色体异常，其中66％为特异性染色体重排。越来越多的资料表明，细胞遗传学改变可以作为ALL独立的一个预后指标。近年来，文献报道细胞因子受体样因子2(cytokine receptor-like factor 2，CRLF2)基因高表达与ALL高危复发及不良预后密切相关。

CRLF2基因定位于染色体Xp22.3/Yp11.3假常染色体区l(PAR1)，编码细胞因子受体样因子2，又名胸腺间质淋巴细胞受体(thymic stromal lymphopoietin receptor，TSLPR)。CRLF2与IL-7受体α(CDl27)相互作用，形成胸腺间质淋巴细胞生成因子(thymicstromal lymphopoietin，TSLP)的异二聚体受体，介导高亲和力的TSLP结合和信号。TSLP/CRLF2信号在T细胞和树突状细胞的发育、炎症反应及过敏反应中有重要作用，并刺激B细胞增殖。CRLF2发生基因重拍或基因突变都可导致ALL细胞表面CRLF2过表达，影响其功能及下游JAK-STAT信号通路。研究报道发现在7％的儿童和15％的成人B-ALL中存在CRLF2基因的过表达，而CRLF2基因过表达与ALL的不良预后相关。有学者进行裸鼠实验发现西罗莫司可终止部分TSLP介导的细胞增殖，西罗莫司作为一种mTOR蛋白特异性抑制剂，与细胞内受体FKBP-12结合形成复合物后直接作用于mTOR中的FRB(FKBP-12.rapamycin binding)结构域从而抑制蛋白活性，在mTOR途径中发挥了重要作用，提示分析CRLF2的基因异常可能作为患者治疗方案的选择依据。

综上所述，CRLF2基因异常可通过影响基因表达及下游JAK-STAT信号通路影响ALL的发病及预后，同时监测CRLF2基因异常可能作为个体化治疗的选择依据。因此，本研究通过Sanger测序法检测CRLF2的全外显子序列，分析CRLF2的基因突变情况，用于预测ALL的预后。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测CRLF2基因突变的引物，采用PCR技术，可用于快速检测急性淋巴细胞白血病患者体内CRLF2基因多态位点的突变情况。所述检测CRLF2基因多态热点突变情况的引物，包括：

扩增CRLF2基因的引物，其碱基序列为：

CRLF2-Exon1-F:TGTAAAACGACGGCCAGTGTGCTTCCTGCCTGTAATCATT

CRLF2-Exon1-R:AACAGCTATGACCATGGAAAGAAACCTCCATGCTCATTG

CRLF2-Exon2-F:TGTAAAACGACGGCCAGTCCGTGAACTTCATGCGTCTC

CRLF2-Exon2-R:AACAGCTATGACCATGCGGCTTGCACAGTCTGATG