[发明专利]一种复合菌制剂及其制备方法和应用

说明书

本发明属于水产养殖领域，本发明公开了一种复合菌制剂及其制备方法和应用，本发明复合菌制剂采用(1)种子的制备；(2)接种凝结芽孢杆菌；(3)接种丁酸梭菌；(4)接种乳酸菌和酵母菌混合种子液，得到复合菌制剂。本发明复合菌制剂可以应用于在水产养殖，能有效降解养殖池塘中的亚硝酸盐，净化水质，促进我国水产业的健康养殖和高效生产。

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种复合菌制剂及其制备方法和应用。

背景技术

高密度集约化养殖水体中，积累了大量的饲料残饵及水产动物的排泄物，造成污染有机物增多，水环境生态系统失去平衡，水体中的亚硝酸盐严重超标，引起水产动物疾病的大面积爆发，影响了水产动物的健康生长。微生物能对水体进行修复，具有无毒、无副作用、无残留、无污染、安全可靠、持续时间长，稳水效果好等特点，越来越受到水产养殖行业的关注。

丁酸梭菌又称酪酸菌，作为一种益生菌在日本、韩国早已得到应用。它是一种专性厌氧的革兰氏阳性芽胞杆菌，可以从土壤和人或者动物的粪便中分离到。研究发现丁酸梭菌有整肠、抗癌、提高免疫力等作用。目前已被制成微生态制剂广泛应用于食品保健、动物饲料等领域。丁酸梭菌有耐高温、耐胆酸盐等特点，既可以产生多种酶和营养物质，又可以抑制有害菌、增殖有益菌，具有非常广阔的应用前景。

丁酸梭菌是专性厌氧芽孢杆菌，不耗氧，其代谢物有机酸能稳定水体pH，代谢物酶类能降解有机质，代谢物抗菌因子能抑制致病菌的生长和繁殖，代谢物B族维生素能促进双歧杆菌和乳酸菌等有益菌的增值。作为水体修复制剂具有天然优势。丁酸梭菌与乳酸菌和酵母菌相互协调才能使得整个养殖环境系统处于生态平衡系统之中，养殖环境中的有机质、氨氮、亚硝酸盐等有害物质处于最低水平。在养殖环境中生物修复方面，丁酸梭菌复合菌制剂就显示了其良好的应用研究前景。

发明内容

本发明的目的是为了克服上述不足而提供一种以丁酸梭菌为主体、产品质量稳定、操作简单、无需复配的复合菌制剂的制备方法，本发明产品可以应用于在水产养殖，能有效降解养殖池塘中的亚硝酸盐，净化水质，促进我国水产业的健康养殖和高效生产。

本发明的技术方案是：

一种复合菌制剂，该复合菌的制备方法为：

(1)种子的制备：取凝结芽孢杆菌斜面，用接种环挑取2环菌苔，接种于营养肉汤中，25～38℃条件下摇床培养12～18小时，得到活化菌液；取丁酸梭菌甘油管种子，接种于RCM培养基中，30～38℃条件下静置培养18～28小时，得到活化菌液；取嗜酸乳杆菌和产朊假丝酵母斜面各一支，用接种环挑取2环嗜酸乳杆菌菌苔，接种于YPD液体培养基中，然后用接种环挑取产朊假丝酵母菌苔，接种于同一个YPD液体培养基中，25～30℃条件下静置培养3～7天，得到乳酸菌和酵母菌混合种子液；

(2)接种凝结芽孢杆菌：取凝结芽孢杆菌活化菌液，按1％～10％接种量接种于发酵罐无菌发酵培养基中，通气、搅拌培养2～6小时，然后不通气、低速搅拌培养1～4小时；

(3)接种丁酸梭菌：取丁酸梭菌活化菌液，按1％～10％接种量接种于步骤 (2)所述发酵罐中，不通气、低速搅拌培养18～32小时；

(4)接种乳酸菌和酵母菌混合种子液：取乳酸菌和酵母菌混合种子液，按 1％～10％接种量接种于步骤(3)所述发酵罐中，继续静置培养3～10天，得到以丁酸梭菌为主体的复合菌制剂；

所述步骤(2)中发酵培养基配方为：葡萄糖2～20g/L，酵母粉1～7g/L，氯化钠0.2～1.0g/L，豆粕2～30g/L，玉米浆粉1～10g/L，磷酸氢二钾0.5～2.0g/L，硫酸镁0.1～1.0g/L，硫酸锰0.1～1.0g/L，硫酸亚铁0.1～1.0g/L，碳酸钙1～20g/L。

复合菌制剂在水产养殖领域的应用。

复合菌制剂具有降低养殖水中亚硝酸盐的作用。