[发明专利]一种活性小球藻多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然活性成分领域，特别涉及一种活性小球藻多糖的制备方法。

背景技术

海洋覆盖着地球的表面积，广阔的海洋面积及其特殊的环境，导致了海洋生物物种的多样性远远超过了陆地生物物种多样性。海洋微生物种类及资源是不可估量的，种类繁多。与陆地环境相比，由于海洋高压、高盐、低温特别是深海或局部高温、寡营养、无光照等特殊生活环境，使海洋微生物不仅以其独特的生物代谢方式在极端的生态环境中得以生存，而且还可以产生与陆地微生物不同的活性代谢产物。特殊环境微生物是在特殊的生境或极端的环境下形成的具有特殊功能或特殊构造与组分的生物资源，它拥有特殊的基因及其表达产物或性状，是人类尚未充分开发利用的珍贵遗传资源宝库，也是获取丰富微生物多糖的宝贵资源。因此，海洋微生物多糖独特的化学结构和生物活性研究受到广泛关注。近年来，海洋微生物多糖的结构及生物活性研究取得了显著进展。真菌多糖作为多糖研究领域中的一个重要分支，因其独特的生物活性而引起越来越多的关注。近年来，已有大量关于真菌多糖生物活性的研究报道，主要集中在抗肿瘤、免疫调节、抗突变、抗病毒、降血脂、降血糖、抗氧化、抗辐射和抗溃疡等方面。

小球藻属于绿藻门（Chlorophyta）绿球藻目（Chlorococcales）卵囊藻科（Oocysteceae）小球藻属（Chlorella），是一种广泛分布的海洋微藻。小球藻中富含多糖类成分，其多糖的生物活性多样，具有很高的抗肿瘤和降血糖活性，可促进脾淋巴细胞及腹腔巨噬细胞的增殖，成为人们研究的重点。

现有技术如授权公告号为CN 103880971 B的中国发明专利，公开了一种小球藻水不溶性多糖提取的方法，该方法包括原料的处理、酶法提取、分离、浓缩、醇沉、干燥等工艺。该多糖原料来源丰富、廉价，可来源于小球藻产油后的残渣，而且方法工艺简单、生产成本低廉，是一种有效提升小球藻高附加值和综合利用率的方法。但是该提取方法的提取效率低，得到的小球藻多糖活性较低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取方法简单可行，机械化操作成度高，提取效率高，耗时短，小球藻多糖的提取率高、活性高，易于工业化规模生产，具有良好的应用价值和市场潜力的活性小球藻多糖的制备方法。

本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：

一种活性小球藻多糖的制备方法，包括超声波破碎、小球藻粗多糖制备、酶解法-Sevage法除蛋白、多糖修饰，其具体步骤为：

超声波破碎：按料液比为1:8-12将小球藻粉和水混合均匀，再加入8-氯茶碱，在超声波功率为500-520MPa的条件下超声波破碎8-15min，然后置于转速为7000-9000r/min的离心机中离心8-15min，留下上清液，备用，8-氯茶碱为脱脂小球藻粉的重量的0.22-0.33‰，8-氯茶碱能提高小球藻粉在水中的分散性，避免团聚现象的发生，使得超声微波能更好地作用于小球藻粉，提高小球藻的破壁率，同时在小球藻多糖提取时能让提取出来的多糖快速溶于水中，缩短了提取时间，减少能源消耗，最终提高小球藻的提取效果和小球藻多糖的得率，该步骤利用超声波对小球藻进行破壁，超声波能够在局部产生强大的高速射流，从而大大增加了传质效率，让细胞内部的多糖等活性物质更加快速完全地释放了出来，具有快速、操作简单、节能、高效等特点；

小球藻粗多糖制备：将超声波破碎步骤得到的上清液的pH调至9.5-10.2，然后在温度为65-75℃下提取3-5h，然后置于转速为3000-5000r/min的离心机中离心8-15min，上清液即为小球藻粗多糖溶液，备用，破碎后的多糖提取率整体高于直接水提的多糖提取率，提取的温度、pH都小于直接水提，大大降低了小球藻多糖提取时所消耗的能源，且能够保护小球藻多糖的螺旋结构不被破坏，进而保持多糖的活性，具有很大的发展前景；