[发明专利]一种活性小球藻多糖的制备方法

权利要求书

1.一种活性小球藻多糖的制备方法，包括超声波破碎、小球藻粗多糖制备、酶解法-Sevage法除蛋白、多糖修饰，其特征在于：所述超声波破碎步骤为：将小球藻粉和水混合均匀，再加入8-氯茶碱，超声波破碎，离心，留下上清液，备用。

2.根据权利要求1所述的一种活性小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述小球藻粉和水的料液比为1:8-12，超声波破碎功率为500-520MPa、时间为8-15min。

3.根据权利要求1所述的一种活性小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述8-氯茶碱为脱脂小球藻粉的重量的0.22-0.33‰。

4.根据权利要求1所述的一种活性小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述小球藻粗多糖制备步骤为：将超声波破碎步骤得到的上清液的pH调至9.5-10.2，然后在温度为65-75℃下提取3-5h，然后离心，上清液即为小球藻粗多糖溶液，备用。

5.根据权利要求1所述的一种活性小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述酶解法-Sevage法除蛋白步骤为：按酶添加量为220-250U/g和380-420U/g向小球藻粗多糖溶液中加入木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶，在温度为50-60℃、pH为7.7-8.5的条件下酶解2-3h，酶解完成后在90-100℃下灭酶20-30min，冷却至室温，然后置于转速为3000-5000r/min的离心机中离心8-15min，再将上清液中以体积比1:3-5加入Sevage试剂，混合后剧烈振摇20-30min，静置分层，分去下层变性蛋白质及交界处有机溶剂，反复2-3次，将上清液干燥得到脱蛋白多糖液。

6.根据权利要求1所述的一种活性小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述多糖修饰步骤为：按料液比为1:80-120将小球藻多糖溶于无水甲酰胺中，冰水浴搅拌，加入酯化试，然后在55-65℃下反应100-150min，反应完成后，恢复至室温，调节pH至6.5-7.5，离心，收集上清液，透析，浓缩至原体积的20-30%，再加入3-5倍浓缩液体积的无水乙醇，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止，静置过夜，进行沉淀多糖，离心，沉淀加水复溶，旋蒸浓缩，冷冻干燥得活性小球藻多糖。

7.根据权利要求6所述的一种活性小球藻多糖的制备方法，其特征在于：所述酯化试为重量比为1:4-6:0.002-0.003的氯磺酸、吡啶和L-丙氨酰-L-谷氨酰胺制备得到。