[发明专利]筛选诱导的多能干细胞的方法

说明书

本发明涉及筛选诱导的多能干细胞的方法。本发明提供使用认定为特异性表达于展现分化抗性的iPS细胞系的lincRNA或mRNA的标志物筛选展现分化抗性的iPS细胞的方法，和这样的标志物。

本申请是申请日为2012年7月25日，申请号为201280036781.9，发明名称为“筛选诱导的多能干细胞的方法”的申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及筛选诱导的多能干细胞的方法。更特别地，本发明涉及在诱导的多能干细胞中通过确认大的基因间的非编码RNA(large intergenic non-coding RNA，lincRNA)或mRNA的表达筛选不展现分化抗性的诱导的多能干细胞的方法。

背景技术

近年来，已相继建立了小鼠和人诱导的多能干细胞(iPS细胞)。Yamanaka等人通过将Oct3/4、Sox2、Klf4和c-Myc基因导入小鼠来源的成纤维细胞以启用这些基因的强制表达诱导了iPS细胞(WO 2007/069666A1和Takahashi,K.和Yamanaka,S.,Cell,126:663-676(2006))。接着，已经表明iPS细胞也能用以上因子的3个来制备(除了c-Myc基因)(Nakagawa，M.等人，Nat.Biotechnol.,26:101-106(2008))。而且，Yamanaka等人通过将以上4个基因导入人皮肤来源的成纤维细胞，成功建立了iPS细胞，与涉及小鼠的情况相似(WO2007/069666 A1和Takahashi,K.等人，Cell,131:861-872(2007))。同时，Thomson等人的小组使用Nanog和Lin28代替Klf4和c-Myc制备了人iPS细胞(WO 2008/118820 A2和Yu,J.等人，Science，318:1917-1920(2007))。iPS细胞能解决生物伦理问题例如胚胎的破坏，能在维持其多能性的同时生长，使得iPS细胞被预期作为再生医学的移植材料。

同时，即使当这样建立的iPS细胞被诱导以分化为特异性的组织细胞时，产生的细胞可能包括具有增殖能力的未分化(或未充分分化的)细胞(Miura K.等人，NatBiotechnol.,27:743-745(2009))。在这种情况下，有移植后肿瘤发生的顾虑。因此，在这样建立的iPS细胞系中筛选不含有对分化诱导展现抗性的细胞的iPS细胞系的方法是希望得到的。

发明概述

技术问题

本发明的目标是有效地选择适合临床应用的安全的iPS细胞(诱导的多能干细胞)。特别地，本发明的目标是提供筛选不展现分化抗性的细胞系的方法。

问题解决方案

为达到以上目标，本发明人使用展现分化抗性的iPS细胞系和不展现分化抗性的iPS细胞系研究了特异性表达于展现分化抗性的iPS细胞系的RNA或特异性表达于不展现分化抗性的iPS细胞系的RNA。因此确认，由特定基因组区编码的大的基因间的非编码RNA(lincRNA)或mRNA特异性表达于展现分化抗性的iPS细胞系或不展现分化抗性的iPS细胞系中。

基于以上结果，本发明人已经发现，通过使用由特定基因组区编码的大的基因间的非编码RNA(lincRNA)或mRNA作为指示物(标志物)可筛选展现分化抗性的iPS细胞，因此完成了本发明。

特别地，本发明包括下列[1]到[9]。

[1]一种筛选不展现分化抗性的人诱导的多能干细胞系的方法，包含如下步骤：

(i)测定选自A组和/或B组的至少一个大的基因间的非编码RNA(lincRNA)或mRNA的表达，

(ii)选择其中选自A组的lincRNA或mRNA表达或其中选自B组的lincRNA或mRNA不表达的人诱导的多能干细胞系；

A组由以下组成：