[发明专利]接种菌剂玉米的根际原核微生物多样性检测方法

权利要求书

1.一种接种菌剂玉米的根际原核微生物多样性检测方法，其特征在于，通过从种植有玉米幼苗的根际土壤中提取宏基因组DNA，通过PCR扩增其中的16SrDNA的V4V5高变区片段以构建文库；经过双端测序后进行分类学单元分类，与文库进行对比和注释，最后通过根际土壤原核微生物的群落结构分析，比较不同处理之间的异同，具体为：Alpha多样性分析、分类学组成分析和Beta多样性分析，得到微生物群体分类；

所述的土壤，其中含有不同硝态氮浓度且施加有巨大芽孢杆菌NCT-2菌剂；

所述的巨大芽孢杆菌NCT-2菌剂，通过将58.9％的巨大芽孢杆菌NCT-2发酵液与23.5％的秸秆粉和17.6％的葡萄糖混匀得到。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的土壤，在种植有玉米幼苗35天后将玉米植株连根从土中取出，用抖根法收集根际土，混合均匀并去除根毛，于-80℃保存。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的不同硝态氮浓度，即22mg/kg、72mg/kg或122mg/kg并与高温灭菌的巨大芽孢杆菌NCT-2制成对比菌剂。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的不同硝态氮浓度，即：N1号菌剂：含NCT-2菌剂且配有22mg/kg硝态氮、N2号菌剂：含NCT-2菌剂且配有72mg/kg硝态氮、N3号菌剂：含NCT-2菌剂且配有122mg/kg硝态氮、S1号菌剂：含NCT-2灭菌菌剂且配有22mg/kg硝态氮、S2号菌剂：含有NCT-2灭菌菌剂且配有72mg/kg硝态氮、S3号菌剂：含NCT-2灭菌菌剂且配有122mg/kg硝态氮。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的PCR扩增，选用特异性引物515F，如SeqID No.1所示和907R，如Seq ID No.2所示分别作为前引物和后引物做PCR扩增所述宏基因组DNA中16SrDNA的V4V5高变区片段以构建文库；

所述的特异性引物具体为：前引物515F序列为5’-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3’，后引物907R序列为5’-CCGTCAATTCMTTTRAGTTT-3’。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的双端测序，采用Illumina公司的TruSeq Nano DNA LT Library Prep Kit制备测序文库，将合格的测序文库使用MiSeq测序仪进行2×300bp的双端测序。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的分类，通过原始下机数据根据序列质量进行筛查、处理和质量控制，对获得的高质量序列进行OTU归并划分。