[发明专利]出芽短梗霉菌及其发酵生产普鲁兰多糖的方法

说明书

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种高产普鲁兰多糖的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans)NCPS2016‑M。本发明所提供的高产普鲁兰多糖的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans)NCPS2016‑M，其特征在于，该菌株于2017年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号是：CCTCC M 2017498。本发明的有益效果在于，本发明所获得的出芽短梗霉菌株摇瓶发酵产普鲁兰多糖的量达到了60 g/L，产普鲁兰多糖的能力为野生出芽短梗霉菌株的1.5‑1.7倍。上述突变株不产黑色素，并且发酵时间比原始菌株缩短了6小时。解决了由于普鲁兰多糖生产水平较低、产品质量不高、极大限制了普鲁兰多糖在国内食品行业尤其是农产品保鲜方面的广泛应用这一技术问题。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种高产普鲁兰多糖的出芽短梗霉菌株。

背景技术

普鲁兰多糖以其优良的成膜性、阻气性、水溶性、生物相容性及可降解等特性，受到食品、医药等行业的青睐，尤其是在农产品保鲜方面得到越来越多的关注。作为优良的食品添加剂和保鲜剂，因国外产品一直处于垄断地位，导致价格居高不下，售价一直在25美元/公斤上下。目前国内该产品生产水平较低，产品质量不高，极大限制了普鲁兰多糖在国内食品行业尤其是农产品保鲜方面的广泛应用。目前，出芽短梗霉被认为是生产普鲁兰多糖的优良菌株，但是目前不同菌株的多糖生产能力参差不齐，并且大多出芽短梗霉菌株在发酵后期会产生黑色素，不易去除，导致普鲁兰多糖后续的纯化成本升高。因此获得不产黑色素的普鲁兰多糖高产菌株是解决以上问题的关键。

常压室温等离子体(ARTP)诱变技术，是利用大气压射频辉光放电(RFAPGD)等离子体技术对生物体进行诱变的一种诱变育种技术。它具有等离子体射流温度低、放电均匀、化学活性粒子浓度高、操作简便、安全性高、诱变快速及突变率高等特点，已成为一种应用广泛的、快速高效的新型生物诱变育种方法。但目前未见关于使用ARTP诱变普鲁兰多糖生产菌株出芽短梗霉以提高多糖产量的报道。

发明内容

为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种高产普鲁兰多糖的微生物菌株(Aurebasidium pullulans)NCPS2016-M，该菌株于2017年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号是：CCTCC M 2017498。

为了解决上述提高普鲁兰多糖产量的技术问题，本发明提供了一种高产普鲁兰多糖的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans)NCPS2016-M，该高产普鲁兰多糖突变株菌株(Aurebasidium pullulans)NCPS2016-M产量大于或等于60g/L，产普鲁兰多糖的能力为野生出芽短梗霉菌株的1.5-1.7倍左右；出芽短梗霉菌株诱变后单菌落大小与原始菌株单菌落相当，菌落形态规则、菌落中间凸起、质地坚硬、周围呈明显褶皱。

本发明的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans)NCPS2016-M发酵生产普鲁兰多糖的方法，包括下述的步骤：

(1)摇瓶种子培养：采用保藏编号为CCTCC M 2017498的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans)NCPS2016-M为生产菌株，活化培养；

(2)将步骤(1)中经过活化培养的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans)NCPS2016-M转接到发酵培养基中进行发酵培养，66h后离心收集发酵上清液，用2倍体积的95％乙醇沉淀多糖，真空干燥。

更具体的，本发明提供的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans)NCPS2016-M发酵生产普鲁兰多糖的方法，包括下述的步骤：