[发明专利]出芽短梗霉菌及其发酵生产普鲁兰多糖的方法

权利要求书

1.一种高产普鲁兰多糖的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans) NCPS2016-M，其特征在于，该菌株于2017年9月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号是：CCTCCM 2017498。

2.如权利要求1所述的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans) NCPS2016-M发酵生产普鲁兰多糖的方法，包括下述的步骤：

（1）摇瓶种子培养：采用保藏编号为CCTCC M 2017498的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans) NCPS2016-M为生产菌株，活化培养；

（2）将步骤（1）中经过活化培养的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans)NCPS2016-M转接到发酵培养基中进行发酵培养，66 h后离心收集发酵上清液，用2倍体积的95%乙醇沉淀多糖，真空干燥。

3.如权利要求2所述的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans) NCPS2016-M发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于，菌株活化培养的步骤是：将出芽短梗霉菌株牛奶冷冻管解冻，转接于斜面培养基上，于恒温培养箱中28℃培养2 d；再转接斜面，28℃恒温培养，连续传代6次。

4.如权利要求2所述的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans) NCPS2016-M发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于，发酵培养的步骤是：将活化后所得的菌株接种于已灭菌的装有种子培养基的锥形瓶中，培养温度为28℃，200 rpm振荡培养24 h，得种子培养物；转接到发酵培养基中，28℃恒温、200 rpm振荡培养66 h。

5.如权利要求2所述的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans) NCPS2016-M发酵生产普鲁兰多糖的方法，其特征在于，沉淀多糖的具体步骤是，将发酵培养所得的发酵液于冷冻离心机中4℃、10000 rpm离心20 min后去除菌体，取上清液加入2-4倍上清液体积的95%乙醇，不断搅拌沉淀多糖，4℃冰箱中静置12 h使多糖充分沉淀，于冷冻离心机中4℃、10000 rpm离心15 min得沉淀，将沉淀于真空干燥机中烘干得普鲁兰多糖。

6.如权利要求1所述的出芽短梗霉菌株(Aurebasidium pullulans) NCPS2016-M发酵生产普鲁兰多糖的方法，包括下述的步骤：

（1）菌株活化培养：将出芽短梗霉菌株牛奶冷冻管解冻，转接于斜面培养基上，于恒温培养箱中28℃培养2 d；再转接于斜面培养基中，于恒温培养箱中28℃培养2 d，连续传代6次，得到第六代斜面培养物；

（2）摇瓶种子培养：采用保藏编号为CCTCC M 2017498的出芽短梗霉菌株为生产菌株，从第六代斜面取两环培养物，转接于种子培养基中，于28℃恒温摇床中200 rpm振荡培养24h，获得种子培养液；

（3）发酵培养：摇瓶发酵培养：将步骤（2）所得种子培养物按5%接种量转接到已灭菌的80 mL发酵培养基中，在500 mL摇瓶中培养，于28℃恒温摇床中200 rpm振荡培养66 h；

10 L发酵罐小试发酵：将种子培养液按5%接种量转接到已灭菌的发酵罐培养基中，发酵温度为28℃，通风搅拌发酵60-66 h，搅拌速度为350 rpm，通风比为1:1；

1 m³发酵罐中试发酵培养：将种子培养液按5%接种量转接到已灭菌的发酵罐培养基中，发酵温度为28℃，通风搅拌发酵60-66 h，搅拌速度为220 rpm，通风比为1:0.6；

（4）沉淀多糖：将发酵液于冷冻离心机4℃、10000 rpm离心20 min收集发酵上清液，取上清液加2-4倍体积的95%乙醇后不断搅拌沉淀多糖，4℃冰箱中静置12 h使多糖充分沉淀，于冷冻离心机中4℃、10000 rpm离心15 min得沉淀，将沉淀于真空干燥机中烘干得普鲁兰多糖。