[发明专利]心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒

说明书

本发明公开了心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒。本体系涉及定量荧光PCR扩增(Quantitive Fluorescent PCR，QF‑PCR)技术和毛细管电泳检测技术。该体系的特点：1、通过多重PCR，实现一管式扩增17个基因上的27个多态性位点。2、检测结果可实现对抗高血压药、抗血小板药和口服抗凝药、调血脂药等常用药物使用提供参考。3、本体系可以实现血液、血卡样本的直接扩增，免除了提取DNA的步骤；4、本体系可整合UDG‑dUTP防污染措施，可以有效防止产物污染。本发明的优点是检测位点覆盖全面、特异性高、灵敏度高、可靠性强、操作简便、实用性强、成本低，具备大批量检测的能力。

技术领域

本发明涉及一种多重荧光PCR技术和毛细管电泳技术。同时检测27个与心血管疾病个性化用药相关基因位点的多态性，为临床上在治疗心血管相关疾病的个性化用药提供参考。属于生物医学领域中的临床分子诊断检测技术。

背景技术

心血管疾病发病率在全世界都有逐年增高的趋势，已成为影响人类健康的第一杀手。然而目前临床上常用的心血管疾病治疗药物，由于个体差异，不同患者服用相同剂量的药物所获得的治疗效果明显不同，这使临床医生应用该药物进行治疗时存在一定困扰。越来越多的研究发现遗传变异是造成药效个体差异的重要因素之一。研究发现，临床上常用的抗高血压药、抗血小板药、口服抗凝药、调血脂药以及其他抗心律失常药、抗心绞痛药等药物的服用或剂量均与基因多态性相关。下面就临床上常见几大类药物及其可能影响其用药的相关基因进行简单描述。

1、血管紧张素转换酶抑制剂：肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)属于激素系统，在血压调节和维持体液平衡中起重要作用。作用于该系统的常见降压药包括以卡托普利为代表的ACEⅠ，以氯沙坦为代表的血管紧张素Ⅱ受阻断剂(AngⅡ)和醛固酮受体拮抗剂螺内酯。编码血管紧张素转化酶的基因ACE、血管紧张素的基因AGT、肾素的基因REN和血管紧张素Ⅱ1型受体AGTR1是该类药物的重要候选基因。该类药物的药理作用复杂，单基因的多态性很难解释这类药物引起的药代、药动学的差异。

2、β受体阻滞剂：β受体阻滞剂是心血管病常用药物之一，其作用靶点主要是位于心肌细胞上的β1受体(ADRB)。该受体存在两种较常见的突变，ADRB1145AG和ADRB11165GC，这两个位点等位基因携带者对β受体阻滞剂的应答较好。CYP2D6是临床上大部分β受体阻滞剂的代谢酶，其基因多态性可显著影响β受体阻滞剂体内清除。在中国人群中，对CYP2D6基因多态性的研究主要集中在CYP2D6*10上。CYP2D6*10酶功能较低，属于中代谢型。

3、钙离子通道阻滞剂：钙通道阻滞剂以二氢砒啶类为代表，通过阻滞L型钙离子通道，抑制血管平滑肌及心肌钙离子内流，使血管平滑肌松弛，心肌收缩力降低，进而使血压下降。研究较多的为代谢酶为CYP3A5，心房利钠肽前体A(NPPA)的多态性对该类药物也有影响。

4、氯吡格雷：氯吡格雷是临床上治疗急性冠状动脉综合征应用最广泛的抗血小板药物，氯吡格雷是药物前体，需经过小肠的吸收和肝脏细胞色素P450的代谢才能转化为有活性的代谢产物。氯吡格雷药物抵抗被认为与遗传因素有关，已有充分研究表明CYP2C19酶在氯吡格雷的代谢中起重要作用。CYP2C19基因存在多个多态性位点，导致个体间CYP2C19酶活存在明显的个体差异。其中CYP2C19*2和CYP2C19*3位点突变均会降低CYP2C19酶的活性，这两种突变可以解释99％的东方人弱代谢者以及约88％的白种人弱代谢者的表型。而CYP2C19*17位点的突变则使CYP2C19酶活性明显增加，CYP2C19*17携带者有着显著的氯吡格雷强反应性以及出血风险明显增加。