[发明专利]经蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽及其制备方法

权利要求书

1.经蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

一、利用等电点沉淀法提取山杏仁蛋白；

二、利用蛋白酶M酶解山杏仁蛋白制备山杏仁蛋白酶解物多肽；

三、将经蛋白酶M酶解制备的山杏仁蛋白酶解物多肽分离纯化，得山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽，所述山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的序列为色氨酸-丝氨酸；

所述步骤二中，利用蛋白酶M酶解制备山杏仁蛋白酶解物多肽的方法为：蛋白酶M对步骤一中得到的山杏仁蛋白进行酶解，酶解后灭酶10min，冷却后离心取上清液，得酶解液，即为山杏仁蛋白酶解物多肽；

蛋白酶M的酶解条件为pH为7.0，温度50℃，底物浓度为50mg/mL，酶添加量与底物的质量比为0.02mg/mg，酶解时间6h；

山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的氨基酸序列为色氨酸-丝氨酸，结构式为：

2.根据权利要求1所述的经蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制备方法，其特征在于：所述的步骤三中，对经蛋白酶M酶解制备的山杏仁蛋白酶解物多肽分离纯化的方法为：

a、超滤酶解液后，真空冷冻干燥，得到山杏仁多肽冻干粉；

b、凝胶层析分离；

c、反相高效液相色谱分离；

d、分子筛分离；

e、反相高效液相色谱纯化，得到ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽。

3.根据权利要求2所述的经蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制备方法，其特征在于：所述步骤a中，超滤酶解液后，收集分子量＜5kDa的酶解液，真空冷冻干燥。

4.根据权利要求3所述的经蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制备方法，其特征在于：所述步骤一中，等电点沉淀法中，

1)取脱脂山杏仁粕粉，按照液料比加入去离子水，配制成山杏仁蛋白溶液；

2)超声使样品蛋白溶出，调节反应溶液的pH、温度，搅拌提取；

3)提取后，取浸提液离心，收集上清液；

4)用1mol/L HCl调节上清液pH至山杏仁蛋白的等电点，离心，弃去上清液，收集沉淀；

5)用去离子水使沉淀复溶，调节溶液pH值，冷冻干燥，得山杏仁蛋白。

5.根据权利要求4所述的经蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制备方法，其特征在于：所述步骤一的2)中，提取温度为37℃，提取时间为60min，pH为9.0，所述的步骤一的1)中，液料比为14mL/g。

6.根据权利要求5所述的经蛋白酶M酶解的山杏仁蛋白源ɑ-葡萄糖苷酶抑制肽的制备方法，其特征在于：所述的步骤一的4)中，山杏仁蛋白的等电点为pI 4.1。