[发明专利]一株产腈水合酶的菌株及用于生产对羟基苯乙酰胺的方法

权利要求书

1.一株产腈水合酶的菌株，其特征在于所述菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期为2017年9月26日，分类命名为阿氏芽孢杆菌 Jn-102，保藏编号为：CGMCCNo. 14668。

2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于所述菌株的16S rRNA基因序列如SEQ.NO.1。

3.利用权利要求1所述菌株发酵生产的腈水合酶催化制备对羟基苯乙酰胺的方法，所述方法具体步骤如下：

1）菌株活化：挑取菌种划线接种至固体保藏培养基，于恒温培养箱28～30℃培养14～20h；

2）液体种子制备：挑取活化菌株接种于装有种子培养基的容器中，纱布封口，于26-37℃，160～200r/min摇床振荡培养12～24h，得液体种子；

3）液体发酵：按体积比5～10%接种量向发酵培养基接入步骤2）制备的液体种子，转速200～700r/min，溶氧控制20～50%，pH7.0～7.5，温度26～37℃，通气培养24～48h，得到腈水合酶的发酵液，8000r/min离心20min收集菌体细胞；

4）催化制备对羟基苯乙酰胺：将10-30g的对羟基苯乙腈加入1L 50mM、pH6.0～8.0的磷酸缓冲液中，搅拌均匀，加入步骤3）收集的菌体细胞10～30g，温度20～30℃，维持转速在50～100 r/min，反应1～5h。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的固体保藏培养基的成分及终浓度：酵母浸粉5 g/L，蛋白胨10 g/L，NaCl 5 g/L，琼脂 20 g/L，pH 7.0，121℃高压蒸汽灭菌20min。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的液体种子培养基的成分及终浓度：酵母浸粉1～10 g/L，蛋白胨5～10 g/L，NaCl 1～5 g/L， pH 7.0，121℃高压蒸汽灭菌20min。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的发酵培养基的成分及终浓度：葡萄糖10 g/L，对羟基苯乙腈 5 g/L，蛋白胨 5-20 g/L，酵母浸粉 1～5 g/L， MgSO₄ 0.1～0.5g/L，硫酸铵 2～7 g/L， KH₂PO₄ 0.1～1 g/L，CoCl₂ 50～100 mg/L，pH 7.0，115℃高压蒸汽灭菌20min。