[发明专利]一种用于检测寨卡病毒的引物组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测寨卡病毒的引物组，其特征在于，包括引物P1、引物P2、引物P3、引物P4、引物P5和引物P6，所述引物P1的序列如SEQ ID NO：1所示，所述引物P2的序列如SEQ ID NO：2所示，所述引物P3的序列如SEQ ID NO：3所示，所述引物P4的序列如SEQ ID NO：4所示，所述引物P5的序列如SEQ ID NO：5所示，所述引物P6的序列如SEQ ID NO：6所示。

2.一种含有权利要求1所述的引物组的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含所述引物组和反应液，所述反应液包括反应浓缩液和逆转录酶；所述反应浓缩液包括DNA聚合酶，缓冲液，dNTP，MgSO₄，甜菜碱和荧光染料。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，还包括对照物，所述对照物包括阳性对照物和阴性对照物。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照物为含目的基因的大肠杆菌质粒DNA，所述目的基因的序列如SEQ ID NO：7所示；所述阴性对照物为不含目的基因的反应液。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物P1和引物P2的浓度为40nM，引物P3和引物P4的浓度为5nM、引物P5和引物P6的浓度为20nM。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组的体积为6ul，所述反应浓缩液的体积为15ul，逆转录酶的体积为1ul。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组中各引物的体积均为1ul。

8.一种使用权利要求1所述的引物组的寨卡病毒检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

A、提取RNA：提取样本中的RNA；

B、引物处理：将引物P1、引物P2、引物P3、引物P4、引物P5和引物P6稀释后，混合均匀；

C、环介导等温扩增反应：将样品、引物试剂和反应液混合均匀后，放入等温扩增荧光检测系统，进行环介导等温扩增反应；所述反应液包括反应浓缩液和逆转录酶；所述反应浓缩液包括DNA聚合酶，缓冲液，dNTP，MgSO₄，甜菜碱和荧光染料；

D、检测：在环介导等温扩增反应过程中，对cDNA的浓度进行分析，得到扩增曲线和溶解曲线；

E、结果判断：根据所获得扩增曲线和溶解曲线判定，若扩增曲线为明显的S型曲线，以及溶解曲线峰型单一且较为尖锐，则判定为阳性结果；扩增曲线没有出现明显S型曲线，则判定为阴性结果；扩增曲线有明显S型曲线，但溶解曲线峰型不单一，则判定为非特异性扩增。

9.根据权利要求8所述的寨卡病毒检测方法，其特征在于，步骤B中，稀释后，所述引物P1和引物P2的浓度为40nM，引物P3和引物P4的浓度为5nM、引物P5和引物P6的浓度为20nM；步骤C中，所述引物组中各引物的体积均为1ul，所述反应浓缩液的体积为15ul，逆转录酶的体积为1ul，样品的体积为3ul；使用定量PCR仪设置65℃、30s/循环，60个循环，循环完成后进行溶解曲线分析或使用恒温荧光PCR仪，设置为65℃，30分钟，进行溶解曲线分析。

10.根据权利要求9所述的寨卡病毒检测方法，其特征在于，步骤C中，设置阳性对照组和阴性对照组，当阳性对照组的检测结果是阳性结果，阴性对照组的检测结果时阴性结果时，则说明实验有效，否则实验无效；所述阳性对照物为含目的基因的大肠杆菌质粒DNA，所述目的基因的序列如SEQ ID NO：7所示；所述阴性对照物为不含目的基因的反应液。