[发明专利]一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于植物活性成分提取技术领域，具体涉及一种从橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法。

背景技术

橄榄苦苷苷是一种裂环烯醚萜苷类多酚化合物，广泛存在于各种木犀科的木犀榄属、丁香属、女贞属等植物中。其分子式为C₂₅H₃₂O₁₃，分子量为540.51。橄榄苦苷苷的主要物理特征如下：易吸潮，熔点87～89℃；易溶于乙醇、丙酮、冰醋酸、5％NaOH溶液等，也可溶于水、丁醇、乙酸乙酯、醋酸丁酯等，几乎不溶于乙醚、石油醚、氯仿、四氯化碳等。

现有许多研究已证实，橄榄苦苷具有多种保健作用和治疗作用的药理活性。橄榄苦苷在临床上作为药品，能抑制病毒、细菌、微生物及其引起的毒素，对低密度脂蛋白胆固醇具有抗氧化作用，能改善高血压、高血脂等心血管疾病，提高T淋巴细胞、NK细胞、吞噬细胞等的再生能力，加强细胞对病毒和感染的免疫能力。

由于橄榄叶中所含橄榄苦苷的含量明显高于果实和树皮，现有多种从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的工艺和方法。这些方法主要包括溶剂提取法、超临界CO₂萃取技术、微波或超声波辅助萃取、过热液体提取法、低温减压沸腾蒸馏提取法等等。上述提取方法中除溶剂提取法外，其它几种方法在提高产品收率和产品纯度以及活性方面均较常规的溶剂提取法有所改善，但这几种方法需要有专门的设备，操作也较为复杂，提取成本较高。

现有用于橄榄苦苷的溶剂提取法在产品纯度提高方面有较好地表现，釆用HPLC检测橄榄苦苷成品的含量(纯度)大约在80～90％之间，如在中国发明专利《从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦苷的方法》(公布号CN 102532217 A)中，釆用HPLC检测橄榄苦苷成品的含量为80％左右，又如在中国发明专利《一种从橄榄叶提取橄榄苦苷和穗花杉双黄酮的方法》(CN 102731592 A)中，釆用HPLC检测橄榄苦苷成品的含量达到97-98％。

但是，现有用于橄榄苦苷的溶剂提取法的产品收率均较低，如在中国发明专利《从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法》(CN 103333213 A)中，橄榄苦苷的提取率仅为6％，又如在中国发明专利《从油橄榄叶中提取分离橄榄苦苷的方法》(CN 104311613 A)中，橄榄苦苷的提取工艺和成品处理过程较为繁杂，且其回收率仅为4.4％。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，该方法不仅工艺简单，而且在保证橄榄苦苷纯度的基础上，提高了橄榄苦苷成品的提取率。

为解决上述技术问题，本发明一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法，包括如下步骤：

1)、粉碎：

将橄榄叶粉碎过10目筛，得到橄榄叶粗粉；

2)、提取、浓缩：

橄榄叶粗粉用20～95％乙醇回流提取三次，合并提取液，浓缩至比重1.1～1.3；

3)、吸附分离：

向浓缩液中加入3～5倍量的水，搅拌均匀，离心，取滤液上大孔吸附树脂，用50～80％乙醇解吸；

4)、脱色、浓缩结晶：

向解吸液中加入2～5％活性炭，回流搅拌脱色2～4小时，冷却过滤，滤液减压浓缩至比重为1.5～1.8，冷却结晶12～24小时；

5)、离心、重结晶：

将结晶粗品离心，沉淀粗品用乙酸乙酯重结晶3～5次；

6)、离心：

将重结晶好的物料倒入离心机离心，沉淀用乙酸乙酯淋洗，得橄榄苦苷精品湿品沉淀；

7)、干燥：

将橄榄苦苷精品湿品沉淀放入烘箱干燥，干燥温度为50～60℃；

8)、粉碎过筛：

将干燥的橄榄苦苷精品粉碎，过80目筛，得橄榄苦苷成品。

在上述技术方案的基础上，为了进一步提高橄榄苦苷成品的提取率，对提取工艺的节点步骤进行优化，其中，在上述步骤2)提取、浓缩中，提取时乙醇的体积比和用量分别优选为：第一次提取时乙醇的体积比为30％、乙醇的用量为1200mL；第二次提取时乙醇的体积比为80％、乙醇的用量为1000mL；第三次提取时乙醇的体积比为20％、乙醇的用量为800mL。

更进一步地，在上述步骤3)吸附分离中，水的使用量为浓缩液的4倍，解吸用的乙醇体积比为80％。

在上述步骤4)脱色、浓缩结晶中，活性炭的使用量优选为3％。

在上述步骤5)离心、重结晶中，乙酸乙酯重结晶的次数优选为3次。